观察增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）标记的 Raw264.7体外分化为破骨细胞的能力，拟为EGFP基因作标志物对外源性破骨前体细胞进行体内追踪做准备。
利用反转录病毒介导pEGFP-Lifeact基因转染Raw264.7细胞；采用有限稀释技术，荧光显微镜下获得EGFP稳定转染的G3单克隆细胞并观察其形态，将稳定转染成功的细胞定为 G3-EGFP转染组，未转染野生细胞作为对照组；核因子κB受体激活子配体（receptor activator of nuclear factor kappaB ligand, RANKL）诱导G3细胞向破骨细胞分化，通过抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase, TRAP）染色、蛋白质印迹法检测组织蛋白酶K、骨吸收陷窝实验观察转染后对破骨细胞形成和骨吸收功能的影响；激光共聚焦显微镜实时拍摄转染细胞向破骨细胞分化过程中伪足小体结构变化的动态影像。
Raw264.7细胞内成功转染EGFP-Lifeact，传至20代以上仍可稳定表达EGFP，建立了G3-EGFP单克隆细胞株；转染细胞无明显形态学变化，能诱导形成 TRAP染色阳性的多核巨细胞，转染组细胞融合率为（35±5）%，对照组细胞融合率为（39±5）%，二者差异无统计学意义（P>0.05）；免疫印迹实验中对照组与转染组中组织蛋白酶K/β-肌动蛋白半定量分析比值分别为0.83±0.07、1.02±0.08，两组细胞组织蛋白酶K表达差异无统计学意义（P>0.05）；对照组与转染组骨吸收总面积分别为272 252±36 193和262 408±23 243（P>0.05），骨吸收陷窝数目分别为320±51和339±55（P>0.05），表明转染不影响破骨细胞形成与骨吸收功能；激光共聚焦显微镜实时拍摄显示转染细胞向破骨细胞分化时不断发生细胞融合，伪足小体作为动态自组装结构不断发生改建，最初聚集形成伪足小体簇，逐渐形成环状结构，最终于成熟破骨细胞周围形成相对稳定的伪足小体带。
EGFP可成功标记Raw264.7细胞；转染并不影响Raw264.7细胞向破骨细胞分化的能力。
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破骨细胞来源于骨髓单核/巨噬细胞系，是体内唯一具有骨吸收活性的多核巨细胞[1,2]。以纤丝状肌动蛋白（filamentous actin，F-actin）为核心的伪足小体，是破骨细胞黏附、运动和进行骨吸收的基本结构[3]。生长在非矿化基质上的破骨细胞伪足小体不断解聚或重新聚合，形成伪足小体簇、伪足小体环及较稳定的伪足小体带，而在矿化基质上破骨细胞能形成较伪足小体带更为致密的封闭带；封闭带锚定在矿化基质上，形成吸收腔隙，破骨细胞在此腔隙内行使骨吸收功能[4]。生理或病理状态下的牙槽骨吸收、重建与破骨细胞数量及功能异常变化有关，为在体外实时监测破骨细胞分化过程，本研究拟应用增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）标记伪足小体的组成核心——F-actin，建立稳定转染EGFP的Raw264.7细胞系，并诱导其向破骨细胞分化，为进一步深入探索体内标记破骨细胞并检测其异常活化的牙槽骨吸收机制奠定基础。
