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本研究旨在通过观察远端肺静脉上经典瞬时受体电位(TRPC)通道蛋白和瞬时受体电位香草酸(TRPV)通道蛋白的表达以及钙池操纵性钙内流(SOCE)的水平,探讨慢性低氧对肺静脉平滑肌的影响,从而研究肺静脉平滑肌在低氧性肺动脉高压发病中的作用及其机制。慢性低氧可造成肺动脉和肺静脉的收缩和血管重塑,其中慢性低氧对肺动脉的影响已得到深入的研究,但针对肺静脉的研究目前尚未获得重视。我们的前期研究结果显示,SOCE是低氧性肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞内钙离子失衡的主要原因,并可引起肺动脉收缩和血管重塑。钙池操纵性钙离子通道(SOCC)是一种钙离子通道,主要由瞬时受体电位通道蛋白构成。
通过建立大鼠远端肺静脉平滑肌细胞培养模型,采用实时荧光定量PCR和Western blot法测定TRPC1–7和TRPV1–6在肺静脉平滑肌和原代肺静脉平滑肌细胞上的表达水平。利用荧光染料Fura–2与细胞内游离钙离子结合产生荧光的原理,测定细胞内SOCE水平。
结果显示,在原代培养的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞中瞬时受体电位通道蛋白mRNA表达量依次为:TRPC1>TRPC6>TRPC4>TRPC2≈TRPC5>TRPC3,TRPV2>TRPV4>TRPV1,大鼠远端肺静脉平滑肌上相应蛋白表达量依次为:TRPC1>TRPC6>TRPC3>TRPC4≈TRPC5,TRPV2≈TRPV4>TRPV1。在大鼠远端肺静脉平滑肌和原代培养的肺静脉平滑肌细胞上都存在TRPC1,TRPC6,TRPV2和TRPV4蛋白的表达。原代培养的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞上存在SOCE,可以被200 μmol/L氯化锰淬灭,并可被SOCC的特异性阻滞剂SKF–96365和氯化镍阻滞。本研究结果提示,瞬时受体电位通道蛋白组成的SOCC通道引起的SOCE参与了肺静脉平滑肌细胞内的钙调节。本研究首次全面研究了瞬时受体电位通道蛋白及SOCE在肺静脉平滑肌上的表达,为进一步全面的研究肺动脉高压发病机制提供新的思路。
原文:Expression of store–operated Ca2+entry and transient receptor potential canonical and vanilloid–related proteins in rat distal pulmonary venous smooth muscle. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol(影响因子4.043),2010,299: L621–L630.