分析DNA错配修复(MMR)蛋白缺陷(dMMR)和完整(pMMR)的结直肠癌(CRC)患者相关基因体细胞突变差异。
收集2015年1月至2017年1月于浙江大学医学院附属第二医院行手术治疗、术后常规免疫组化检测报告为dMMR的93例CRC患者石蜡病理组织行二代测序技术检测。采用免疫组化法检测93例CRC患者肿瘤组织中4种MMR蛋白(MLH1、MSH2、MSH6和PMS2)的表达情况，依据美国病理学家协会(CAP)标准对免疫组化检测结果进行重新判读。采用二代测序技术检测93例CRC患者石蜡病理组织中41个基因的体细胞突变情况，采用Fisher精确检验分析组间基因突变差异。
依据CAP标准重新判读后，93例CRC患者中pMMR组31例，dMMR组62例。dMMR组基因突变中位数为9.5个，高于pMMR组(3.0个，P<0.001)。dMMR组和pMMR组中17个基因存在体细胞突变差异，分别为乳腺癌易感基因1(BRCA1)、BRCA2、MLH1、PDGFRA、PIK3CA、APC、ATM、KIT、MET、PMS2、MSH6、POLE、MSH2、PTCH1、表皮生长因子受体(EGFR)、TP53和ERBB2基因。dMMR组致病体细胞BRAF、MLH1、MSH2和MSH6基因突变率高于pMMR组[分别为21.0%(13/62)和9.7%(3/31)，9.7%(6/62)和0(0/31)，21.0%(13/62)和0(0/31)，22.6%(14/62)和0(0/31)，均P<0.05]。BLM N515fs、BRAF V600E、PTCH1 R1308fs和KRAS G13D位点突变率在dMMR组和pMMR组CRC中差异均有统计学意义[分别为22.6%(14/62)和0(0/31)，19.4%(12/62)和3.2%(1/31)，11.3%(7/62)和0(0/31)，16.1%(10/62)和3.2%(1/31)，均P<0.05]。在MLH1和PMS2共同缺失的dMMR患者中3个不常见位点BLM N515fs、MSH6 F1088fs和PTCH1 R1308fs的突变率分别为28.2%(11/39)、15.4%(6/39)和15.4%(6/39)，与pMMR患者[均为0(0/31)]比较，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
dMMR结直肠癌患者有更多的相关基因发生体细胞突变。BRAF V600E突变与dMMR密切相关。KRAS G13D、BLM N515fs和PTCH1 R1308fs突变位点也与MMR蛋白的表达有关。
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结直肠癌(colorectal cancer, CRC)的发病率和死亡率均位居全球恶性肿瘤的第3位[1]。在中国，结直肠癌发病率和死亡率均位居第5位，且有逐年升高趋势[2]。DNA修复是细胞对DNA受到损伤后的一种反应，可以使细胞适应外界的影响。DNA修复系统包括碱基切除修复、核苷酸切除修复、重组修复以及错配修复(mismatch repair, MMR)。MMR是指当DNA中发生碱基错配时，使核苷酸序列恢复正常的修复方式。MMR系统主要由2大家族基因mutS和mutL组成，分别称为MSH和MLH基因，其中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2是参与CRC MMR的修复的4个常见错配修复基因。MMR基因的表达缺失可引起DNA复制过程中错配的累积，导致微卫星不稳定(microsatellite instability, MSI)的发生，即单个或多个核苷酸串联重复排列的DNA序列较正常细胞的DNA长度发生了变异[3]，从而可能导致某些基因的异常突变，促进肿瘤的发生和发展。2005年，第1个使用焦磷酸测序方法的二代测序技术(next generation sequencing, NGS)被应用[4]。NGS可以在未知特定基因的情况下识别和量化转录物，并提供关于选择性剪接和序列变异的信息[5]。NGS在各种实体瘤中均有应用，可以检测某种恶性肿瘤的关键癌基因，为临床靶向治疗提供方案选择。在CRC中，多个基因已被发现与肿瘤的发生发展有关，NGS可以同时检测多个基因来寻找致病相关基因。有研究表明，CRC中MMR系统缺陷可以导致肿瘤较高的体细胞突变数量[6]。本研究中，我们运用NGS技术分析MMR缺陷(deficient MMR, dMMR)和MMR完整(proficient MMR, pMMR)的CRC患者体细胞突变之间的差异，并寻找差异的基因和位点，为临床诊疗提供参考。
