探讨神经上皮细胞转化基因1(Net1)对细胞辐射敏感性的影响及相关的分子作用机制。
运用实时荧光定量PCR检测辐射后细胞中Net1基因表达水平的变化；采用RNAi干扰技术抑制细胞中Net1的表达，用克隆形成率分析细胞的辐射敏感性；利用免疫共沉淀技术发现Net1的结合蛋白。
电离辐射损伤后，细胞中的Net1 mRNA水平显著上升(t ＝–10.52，P<0.05)；与对照组相比，siRNA沉默细胞中的Net1表达后明显增加了细胞的辐射敏感性(t＝15.31、11.65，P<0.05)；无论在正常状态下还是在细胞受到辐照后，Net1都能与非同源末端连接修复蛋白Ku70、Ku80和DNA-PKcs结合。
Net1对细胞的辐射防护作用可能是通过与非同源末端连接修复蛋白相互作用来调控辐射损伤修复实现的。
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神经上皮细胞转化基因1 (neuroepithelial cell transforming gene 1，Net1)是RhoA GTP酶的一种特异性鸟苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factors，GEFs)[1]。RhoA GTP酶是所有Rho GTP酶超家族成员中被研究得最多的小G蛋白之一，它同Rho家族的所有成员一样在与GTP结合的活化型和与GDP结合的失活型两种构象之间循环[2]。Net1的作用就是催化RhoA释放GDP并结合GTP，从而活化RhoA GTP酶。RhoA参与调控细胞中的许多信号通路，主要调节细胞骨架的动态变化、基因表达、细胞周期、细胞转化等[3]。RhoA及其GEFs在细胞中的定位是决定其在不同信号通路中发挥作用的重要因素之一[4]。绝大多数RhoA及其GEFs都位于细胞质中，目前仅发现RhoA的2种GEFs具有核定位序列，即Net1和Ect2主要位于细胞核中[1,5]。有研究发现，在正常状态下，一部分RhoA位于细胞核中，当细胞受到电离辐射刺激后，定位于细胞核中的Net1可以激活核中的RhoA[6,7]。本研究采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)和免疫共沉淀(co-immunoprecipitation，Co-IP)等分子生物学技术，从分子水平上研究了Net1在细胞受到电离辐射损伤后的反应及可能的作用机制。
