建立酶联凝集素测定法(enzyme-linked lectin assay，ELLA)检测接种流感疫苗志愿者血清中神经氨酸酶抑制(neuraminidase inhibition，NI)抗体。
对神经氨酸酶切底物、酶标抗体孵育浓度和时间、最适病毒量以及病毒稀释液pH值等反应条件进行优化，确定合适的反应体系，采用建立的方法检测对接种H7N9大流行流感疫苗34名志愿者血清样本进行检测。
胎球蛋白作为酶切底物最佳包被浓度为7.5 μg/ml；酶标抗体最佳稀释度为1∶500，H7N9疫苗株作为抗原使用pH6.5的稀释液稀释至浓度4.5lgCCID50/ml。疫苗接种后血清样本抗N9型NI抗体滴度较接种前均有显著增高(P<0.001)，在34名志愿者中，47%的人NI抗体接种后呈阳性反应(NI抗体滴度≥40)，低于HI抗体反应阳转率(P<0.05)。
建立的基于天然底物检测NI抗体的ELLA法简单实用，为流感疫苗和血清流行病学NI抗体免疫评价体系的建立提供实验资料。
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神经氨酸酶(NA)是流感病毒表面两个主要抗原之一[1]，主要是通过酶切作用将新形成的病毒粒子从感染细胞释放以利于病毒扩散，从而促进流感病毒进入表皮靶细胞复制[2]。神经氨酸酶抑制(neuraminidase inhibition，NI)抗体能够减弱病毒复制能力，细胞学实验显示NI抗体减少流感病毒感染细胞后形成的蚀斑大小。临床前研究和临床研究也已经证实NA特异性免疫与流感病毒保护作用相关，能够减少病毒逃逸和减轻发病症状[3,4,5,6]。传统的硫代巴比吐酸法(the conventional thiobarbituric acid assay, TBA)是世界卫生组织推荐用于流感病毒血清分型分析的方法，通过检测NA切割特定底物后释放的游离唾液酸含量，经过碘酸盐的氧化作用，转化成为β-甲醛丙酮酸，在硫代巴妥酸的作用下形成生色团，经有机溶剂提取生色团，经分光光度计测定神经氨酸酶的活性，从而判定抗NA抗体干扰酶活性的程度[7]。该方法使用大量有毒的化学物质对样本进行处理，操作繁琐，无法进行大量样本检测，难以在流感血清流行病学和疫苗评价中应用。本研究通过比较红细胞、胎球蛋白和神经节苷脂三种流感病毒神经氨酸酶作用的底物，拟建立基于天然底物的酶联凝集素测定法(enzyme-linked lectin assay, ELLA)，辣根过氧化物酶标记的花生凝集素直接识别NA作用的天然底物去除唾液酸后的倒数第二个半乳糖，该方法特异快速、简单，因此可以用于量化检测流感疫苗血清NI抗体水平。
