
为了研究轮状病毒疫苗株VP8*蛋白的功能和结构特征,利用原核表达系统纯化得到VP8*核心区蛋白(VP8*core,64-223位氨基酸)。
从口服疫苗中提取兰州疫苗株LLR病毒核酸,RT-PCR得到目的片段,克隆到pET30a载体中构建重组质粒。根据已合成的Rotateq和Rotarix P[8] VP8*全长基因,PCR得到VP8*核心区片段,克隆到pET30a载体构建重组质粒。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)进行蛋白表达。利用HistrapHP和superdex200纯化柱,通过亲和层析和分子筛层析纯化得到目的蛋白。
VP8*核心区蛋白以可溶形式表达,并通过纯化得到较纯的VP8*core蛋白,聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)显示相对分子质量约为20 kDa。
成功构建了pET30a-VP8*core重组质粒,得到轮状病毒各疫苗株VP8*core蛋白,为研究疫苗株受体结合特征以及疫苗评价提供了基础和参考。
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轮状病毒(Rotaviruses, RVs)是引起人类和动物病毒性腹泻的重要病原之一,据报导每年有超过200万婴幼儿因轮状病毒感染住院,并且有大约50万婴幼儿因轮状病毒感染而死亡[1]。轮状病毒主要通过粪口途径传播,一般在感染后1~2 d发病,轮状病毒可引起肠胃炎,临床表现从无症状、轻微腹泻到伴随发烧和呕吐的重度腹泻,严重时引起脱水、电解质紊乱甚至死亡。目前针对轮状病毒感染尚无特效药物,一般是对症治疗,但是疫苗接种可以提供较好的保护,降低病毒感染率,是预防轮状病毒感染的有效途径。目前应用的轮状病毒疫苗有默克公司的Rotateq和葛兰素史克公司研发的Rotarix。Rotateq是由五价的人牛轮状病毒重配株制备的减毒活疫苗,包括G1-G4和P[8][2]。Rotarix是由人轮状病毒G1P[8]型毒株得到的单价减毒疫苗[3]。我国使用的是兰州生物制品研究所采用羊G10P[15]型RV研制的口服活疫苗[4]。轮状病毒疫苗的使用降低了轮状病毒的感染,具有重要意义。





















