研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate, EGCG)抑制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)复制的分子机理。
利用CCK-8测定细胞的活力。利用荧光定量PCR方法检测细胞内外HBV DNA的含量。利用Western Blot检测HNF4a的表达及siRNA对HNF4a的敲除作用。
本研究发现，利用EGCG处理HepG2.2.15细胞可显著降低细胞内外HBV DNA的含量，但不影响细胞的活性，表明EGCG具有抑制HBV复制的作用。前人研究发现，肝细胞因子4a(HNF4a)是一个促进HBV复制的重要细胞因子。本研究中发现，EGCG可显著下调HepG2.2.15细胞中HNF4a的表达。沉默HNF4a表达后，EGCG抑制HBV DNA复制的作用显著下降。
上述结果提示，在HepG2.2.15细胞中，通过下调HNF4a的表达，从而抑制HBV DNA复制，可能是EGCG发挥其抗HBV作用的一条重要途径。
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表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate，EGCG)是绿茶中茶多酚的主要组成成分。在干的绿茶叶子中，EGCG的含量占据所有茶多酚的59%左右[1]。EGCG具有广谱抗病毒作用，可有效抑制乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)、丙肝病毒(hepatitis C virus，HCV)、登革病毒(dengue virus，DENV)、基孔肯雅病毒(chikungunya virus，CHIKV)、寨卡病毒(zika virus，ZIKV)、EB病毒(Epstein－Barr virus，EBV)、人类免疫缺陷病毒(human immunodefi－ciency virus，HIV)等多种病毒的复制[1]。在抗HBV方面，有研究报道，EGCG可阻止HBV与其受体NTCP结合[2]，并抑制HBV DNA复制、HBV RNA和HBV cccDNA合成等多个过程[3,4]。然而，EGCG调控宿主细胞因子，进而抑制HBV复制的分子机理却鲜有报道[5]。HNFs(hepatocyte-enriched nuclear factors)是宿主肝细胞中调控基因表达的一类转录因子的总称。有研究报道，在众多的HNFs蛋白亚型中，HNF4α在HBV复制的细胞模型中表达上调，并促进HBV的复制[6]。考虑到EGCG可调控基因转录[7,8,9]，此次研究了EGCG对HNF4α表达的影响以及HNF4α在EGCG介导的抗HBV信号通路中的作用。研究发现：(1)EGCG显著下调HepG2.2.15细胞中HNF4α的表达；(2)在Hep.2.15细胞中，利用siRNA沉默HNF4α的表达，显著降低HBV DNA的含量；(3)在siRNA介导的HNF4α沉默的细胞中，EGCG对HBV复制的抑制作用变弱。综上所述，本研究提示，EGCG通过下调HNF4α的表达可能是其发挥抗HBV作用的一种重要途径。
