病毒病诊断与治疗
NanoLuc标记的重组克里米亚-刚果出血热病毒及其初步用于抗病毒药物筛选
中华实验和临床病毒学杂志, 2018,32(6) : 620-624. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2018.06.013
摘要
目的

为了构建可分泌表达NanoLuc荧光素酶的重组克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,CCHFV)并探讨其用于抗病毒药物高通量快速初筛的可行性。

方法

将NanoLuc基因与CCHFV M节段上的mucin编码框融合,拯救重组病毒,并以利巴韦林为阳性对照,评估Furin抑制剂在体外对重组病毒的抑制效果。

结果

成功获得可分泌表达NanoLuc荧光素酶的重组CCHFV(rCCHFV_mucin_NLuc),且在感染细胞上清中,表示NanoLuc活性的相对光单位(relative light unit,RLU)与病毒半数组织感染剂量(TCID50)呈显著正相关性(cor=0.998, P=0.001)。10 μmol/L浓度下,Furin抑制剂处理后1~3 d感染细胞上清中NanoLuc荧光素酶活力与利巴韦林处理组无明显差异(P>0.1),但第4天Furin抑制剂处理组上清中RLU值显著高于利巴韦林处理组(P=0.001),且与未处理病毒对照组无明显差异(P > 0.1)。

结论

成功构建1株NanoLuc标记的rCCHFV并可用于抗病毒药物的体外快速初筛。

引用本文: 夏菡, 袁志明, Dennis Bente. NanoLuc标记的重组克里米亚-刚果出血热病毒及其初步用于抗病毒药物筛选 [J] . 中华实验和临床病毒学杂志, 2018, 32(6) : 620-624. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2018.06.013.
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克里米亚-刚果出血热(Crimean-Congo hemorrhagic fever,CCHF),在我国又称"新疆出血热",是一种以蜱为主要传播媒介的烈性传染病,病死率高达40%[1,2]。其致病原克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV)的基因组为3节段负链RNA:S基因编码病毒核蛋白(nucleoprotein, NP),M基因编码一个多聚蛋白(glycoprotein,GP),L基因编码病毒RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase, RdRp)[3,4]。CCHF长期在非洲、巴尔干、中东和亚洲流行,随着全球气候变化、媒介蜱活动范围扩大和贸易活动增加,CCHF在我国再暴发和扩散的风险存在[5,6,7,8,9,10,11]。当前对于CCHFV致病机理和病毒媒介宿主相互作用等研究不足,且无有效的特异性药物或疫苗,为了保障国家生物安全,需要加强对其研究。

 
 
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