2019年12月湖北省武汉市相继出现新型冠状病毒肺炎病例，目前国际病毒分类委员会已将引起该病症的病毒正式命名为SARS-CoV-2^[1]。新型冠状病毒(2019-nCoV)属β冠状病毒属，同为β冠状病毒属的中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)和严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)曾大规模暴发^[2,3]。截至2020年5月19日24时，据31个省(自治区、直辖市)和新疆生产建设兵团报告，累计确诊病例80 965例，累计死亡病例4 634例^[4]。

2019-nCoV基因组中ORF1ab和N基因是保守序列，《新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南(第六版)》规定，实时荧光检测上述2个特异性靶基因结果均为阳性时报告新型冠状病毒核酸阳性。《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》中指出，在疑似病例基础上，实时荧光检测新型冠状病毒核酸阳性是判定确诊病例依据之一^[5]。核酸检测的灵敏度和特异度高，但容易受到样本在采集、保存、运输、检测等环节的影响出现假阴性^[6,7]。目前2019-nCoV检测试剂盒中含阴阳质控品各一，仅能对核酸提取和PCR过程进行有限监控。为了实现从样本采集后到检测的全程监控，提高检测的灵敏度和特异度，本研究制备了2019-nCoV质控品，并进行了均一性和稳定性评价。

根据荧光定量PCR原理可知，每个反应管的Ct值与反应管内模板起始拷贝数的对数成线性相关^[8]。由标准曲线得出各组阳性质控品病毒拷贝数依次为10⁶、10⁵、10⁴、10³、10²拷贝/ml，阳性质控品梯度稀释准确。安全性评价中，接种阳性质控品的Vero-E6细胞未出现CPE，证明了经灭活的阳性质控品的安全性。病毒毒株经过56 ℃、30 min灭活后，质控品的实验操作可在一、二级生物安全实验室内进行。在均一性评价中，根据Westgard多规则质控法^[9]，A6(A组第6号质控品，下同)、D20、E12出现1_2S警告状态，其Ct值依次为24.28、30.14、33.37，进一步使用1_3S、2_2S、4_1S、R_4S、10_X规则可判定A、D、E组阳性质控品在控，出现1_2S警告状态可判定为随机误差；B、C组阳性质控品Ct值均在警告限内，即B-D组阳性质控品在控。实验周期为10天的稳定性评价中，37 ℃条件下的质控品稳定性差，不能作为标准质控品；室温条件下其稳定性可维持数日，4 ℃条件下稳定性好。质控品病毒载量高达10⁶拷贝/ml的情况下，37 ℃和常温条件下其稳定性仍受不同程度影响。提示在实际检测工作中，受检者样本及时送检或4 ℃保存运送，可减少假阴性的出现。基于日常实验室工作经验、疫情下样本检测周期较短的原因，此次稳定性评价中没有加入-20 ℃的保存条件，如今后应用过程中确实存在-20 ℃保存的需求，增加-20 ℃的保存条件可进一步增加稳定性评价的完整性。

本次使用的2019-nCoV核酸检测试剂盒使用说明显示的分析灵敏度即最低检测限为500拷贝/ml。理论上而言，弱阳性质控品浓度越接近最低检测限，检测的灵敏度越高。但有研究表明，浓度接近最低检测限的质控品的检测稳定性较低，易受核酸提取过程(如有机溶剂去除不彻底)、扩增过程(如仪器、试剂、孔间温度不均一性)、实验人员个体操作差异等问题影响，导致出现假阴性结果^[6,7,10]。因此有建议称，核酸检测的弱阳性质控品浓度应为检测限的2~5倍^[11]。本次实验中E组质控品为弱阳性质控品，病毒载量为10²拷贝/ml，现实中可能出现因试剂盒不同导致检测限不同的情况，此时应选择相应浓度的质控品作为其弱阳性质控品。

患者感染2019-nCoV的临床诊断依据包括流行病学史、临床症状、实验室检测结果，确诊需以实验室检测为准^[5]。《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》中指出检测方法分为病原学检测和血清学检测，病原学检测又分为病毒基因测序和实时荧光定量PCR检测，血清学检测为IgM、IgG特异性抗体检测。基因测序准确性是三者中最高的，缺点是检测成本高、检测周期长，不适合在临床检测中大规模开展。荧光定量PCR检测优势在于灵敏度和特异度均较高，其不足在于检测结果容易受样本、实验条件、试剂等影响而出现灰区或假阴性。第七版诊疗方案首次加入了血清学检测作为确诊依据。与核酸检测相比，特异性抗体检测操作更为简单快捷，其灵敏度和特异度降低，可作为核酸检测很好的补充。核酸检测(荧光PCR法)是当前疫情防控形势下重要的检测手段，本研究制备新型冠状病毒质控品均一性和稳定性好，在4 ℃保存条件下、病毒拷贝数10²~10⁶范围内，阳性质控品病毒拷贝数的对数值与Ct值呈线性关系，可作为2019-nCoV核酸检测的质控品。该质控品可在样本采集后随同样本保存运送、参与核酸提取及荧光PCR检测，这种全程监控可有效提高检测的灵敏度和特异度，既为检测工作提供良好的参照，也为疫情防控多增加一份保障。