探讨新疆地区维吾尔族人群环指蛋白145(RNF145)基因单核苷酸多态性(SNP)与急性心肌梗死(AMI)的关联性。
选取2016年6月至2020年6月在新疆医科大学第一附属医院心脏中心住院的患者，根据是否为AMI，分为AMI组(410例)和对照组(484例)。比较两组的基线资料。采用改进的多重高温连接酶检测反应技术对RNF145基因3个SNP位点(rs12188266、rs17056583、rs7732603)进行基因分型。采用logistic回归分析RNF145基因SNP位点与AMI发病的关系。
AMI组中有饮酒史、合并高血压、糖尿病病史的患者比例以及收缩压、总胆固醇水平均高于对照组，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。RNF145基因rs17056583和rs7732603位点的基因型和等位基因比较均有统计学差异(均为P<0.05)。在校正饮酒、合并疾病及血清学指标后，logistic回归分析结果显示，新疆维吾尔族人群中rs17056583位点的CC基因型患AMI风险是GC+GG基因型的2.891倍(OR＝2.891，95%CI：1.608~5.196，P<0.001)。rs7732603的CC基因型患AMI的风险也明显高于AA和AC基因型者(OR＝1.860，95%CI：1.201~2.882，P＝0.005)。
在新疆地区维吾尔族人群中RNF145基因SNP与AMI具有相关性，rs17056583的CC基因型可能是AMI发病的危险因素，且携带rs7732603位点C等位基因者患AMI的风险也显著增加。
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冠心病主要是由于血液中脂质异常增加，沉积在损伤的动脉内膜，形成动脉粥样硬化斑块，导致不同程度的冠状动脉狭窄和心肌缺血，进而导致一系列并发症，其中最严重的是急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)[1,2,3]。吸烟、肥胖、高血压、糖尿病和高脂血症等都是AMI的主要危险因素；此外，遗传因素也是AMI的独立危险因素之一。
环指蛋白145(ring finger protein 145，RNF145)基因编码一种内质网驻留的E3泛素连接酶，在胆固醇合成中起重要的作用。RNF145可以促进胆固醇合成限速酶3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(recombinant 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase，HMGCR)的泛素化调节，降低胆固醇水平[4]。同时，RNF145还可以引起固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage activating protein，SCAP)泛素化，干扰SCAP和外被蛋白Ⅱ(coat protein Ⅱ，COP Ⅱ)的结合，从而抑制固醇调节元件结合蛋白2(sterol regulatory element binding protein 2，SREBP-2)的成熟，达到降低胆固醇水平的作用[4]。研究表明，RNF145可以抑制内源性胆固醇的合成，不仅是降低胆固醇合成重要的调控因子，还是调节人体血脂水平的新靶标[4]。因此，本研究旨在探讨RNF145基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)在中国新疆维吾尔族人群中分布特征的差异，以及该基因多态性与AMI遗传易感性之间的关系。
选取2016年6月至2020年6月在新疆医科大学第一附属医院心脏中心住院的患者，共纳入894例具有RNF145基因型完整数据的受试者，根据是否为AMI，分为AMI组(410例)和对照组(484例)。纳入标准：(1)心肌梗死：符合世界卫生组织诊断标准[5]，具有典型的临床表现、心电图和心肌酶特征，并经冠状动脉造影证实。其中男性221例，平均年龄为(57.7±11.0)岁；(2)对照组：经冠状动脉造影检查后证实无血管狭窄堵塞或狭窄程度小于50%的患者，且经详细询问病史、体格检查及胸片、标准12导联心电图、肝胆B超、血尿便常规均未见明显异常，其中男性230例，平均年龄为(51.3±12.1)岁。以上两组均为维吾尔族人群，长期居住新疆，无血缘关系。排除标准：(1)合并恶性肿瘤、结缔组织病、先天性心脏病、瓣膜性心脏病、主动脉夹层以及多器官功能衰竭者；(2)有精神疾病不能配合研究者；(3)临床资料不完整者。本研究符合医学伦理学要求，所有患者均签署知情同意书。
由专业人员进行身高和体重的测量，并详细了解既往史和生活史。我院检验中心测定总胆固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)等血液生化指标。
采集5.0 ml空腹静脉血，4 000 r/min离心10 min分离血浆和红细胞，-80℃保存，应用全血基因组提取试剂盒(北京百泰克生物技术有限公司)提取全基因组DNA，并严格按试剂盒说明书进行操作。RNF145基因位于人类第5号染色体的长臂，包含16个外显子和15个内含子。使用Haploview 4.2软件，以中国汉族人为参照，设置最小等位基因频率≥0.05，r2>0.8，参照国际人类基因组单体型图计划网站(http：//hapmap.ncbi.nih.gov/index.html.en)Ⅱ期数据库，选取了RNF145基因的3个标签SNP位点(rs12188266、rs17056583、rs7732603)。改进的多重高温连接酶检测反应(iMLDR)技术对RNF145基因3个SNP位点进行基因分型。
使用SPSS 23.0软件进行数据分析。应用Hardy-Weinberg(H-W)遗传平衡检验样本的群体代表性；正态分布的计量资料以
±s表示，组间比较采用t检验；计数资料用百分构成比表示，组间比较采用χ2检验。采用多因素非条件logistic回归分析RNF145基因SNP位点与AMI发病的相关性，并计算比值比(odds ratio，OR)及其95%置信区间(confidence interval，CI)。双侧P<0.05为差异有统计学意义。
AMI组中有饮酒史、合并高血压、糖尿病病史的患者比例以及收缩压、TC水平均高于对照组，差异均有统计学意义(均为P<0.05)，见表1。
两组一般资料及血清学指标比较
两组一般资料及血清学指标比较
| 项目 | AMI组(410例) | 对照组(484例) | t/χ2值 | P值 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 一般情况 | |||||
| 女性[例(%)] | 189(46.1) | 254(52.5) | 3.62 | 0.057 | |
年龄( ±s，岁) | 57.73±11.03 | 51.29±12.14 | 1.48 | 0.224 | |
BMI( ±s，kg/m2) | 27.20±4.26 | 27.26±4.24 | 0.12 | 0.733 | |
| 吸烟[例(%)] | 122(29.8) | 118(24.4) | 3.27 | 0.071 | |
| 饮酒[例(%)] | 63(15.4) | 50(10.3) | 5.097 | 0.024 | |
| 高血压[例(%)] | 215(52.4) | 159(32.9) | 35.00 | <0.001 | |
| 糖尿病[例(%)] | 102(24.9) | 49(10.1) | 34.421 | <0.001 | |
血压( ±s，mmHg) | |||||
| 收缩压 | 146.50±34.49 | 134.50±28.58 | 31.73 | <0.001 | |
| 舒张压 | 86.20±20.89 | 82.91±35.14 | 1.66 | 0.197 | |
实验室检查( ±s) | |||||
| 尿素氮(mmol/L) | 5.89±5.71 | 5.63±3.83 | 1.38 | 0.240 | |
| 肌酐(μmol/L) | 72.15±44.00 | 68.46±44.35 | 2.41 | 0.121 | |
| 尿酸(μmol/L) | 294.27±93.62 | 291.39±94.73 | 0.04 | 0.844 | |
| 三酰甘油(mmol/L) | 1.92±1.27 | 1.68±1.17 | 2.91 | 0.088 | |
| 总胆固醇(mmol/L) | 3.93±1.19 | 4.08±0.97 | 13.79 | <0.001 | |
| HDL-C (mmol/L) | 1.06±0.64 | 1.12±0.66 | 0.58 | 0.447 | |
| LDL-C (mmol/L) | 2.53±0.91 | 2.64±0.85 | 3.58 | 0.059 | |
注：AMI：急性心肌梗死；BMI：体质指数；HDL-C：高密度脂蛋白胆固醇；LDL-C：低密度脂蛋白胆固醇
AMI组和对照组基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡检验(P>0.05)，具有群体代表性。
对于rs17056583位点，两组人群中3种基因型(GG、GC、CC)和等位基因频率分布差异均有统计学意义(均为P<0.001)，其中AMI组CC基因型明显高于对照组。显性模型(GG比GC+CC)及隐性模型(CC比GC+GG)分布差异有统计学意义(均为P<0.05)。在rs7732603位点中，3种基因型(AA、AC、CC)频率分布差异有统计学意义(P＝0.02)，且等位基因的分布差异也有统计学意义(P＝0.044)，其中隐性模型(CC比AA+AC)分布差异有统计学意义(P＝0.005)。rs12188266位点的两组人群基因型和等位基因频率分布的差异均无统计学意义(均为P>0.05)，见表2。
AMI组和对照组的基因型及等位基因分布
AMI组和对照组的基因型及等位基因分布
| 基因型 | 模型 | AMI组(410例) | 对照组(484例) | |
|---|---|---|---|---|
| s12188266 | ||||
| 基因型 | AA | 335(81.7) | 391(80.8) | |
| AG | 68(16.6) | 91(18.8) | ||
| GG | 7(1.7) | 2(0.4) | ||
| 显性模型 | AA | 335(81.7) | 391(80.8) | |
| AG+AA | 75(18.3) | 93(19.2) | ||
| 相加模型 | AG | 68(16.6) | 91(18.8) | |
| AA+GG | 342(83.4) | 393(81.2) | ||
| 隐性模型 | GG | 7(1.7) | 2(0.4) | |
| AA+AG | 403(98.3) | 482(99.6) | ||
| 等位基因 | A | 738(90.0) | 873(90.2) | |
| G | 82(10.0) | 95(9.8) | ||
| rs17056583 | ||||
| 基因型 | GG | 211(51.5) | 289(59.7) | |
| GC | 155(37.8) | 177(36.6) | ||
| CC | 44(10.7) | 18(2.7) | ||
| 显性模型 | GG | 211(51.5) | 289(59.7) | |
| GC+CC | 199(48.5) | 195(40.3) | ||
| 相加模型 | GC | 155(37.8) | 177(36.6) | |
| GG+CC | 255(60.2) | 307(63.4) | ||
| 隐性模型 | CC | 44(10.7) | 18(2.7) | |
| GG+GC | 366(89.3) | 466(96.3) | ||
| 等位基因 | G | 577(70.4) | 755(78.0) | |
| C | 243(29.6) | 213(22.0) | ||
| rs7732603 | ||||
| 基因型 | AA | 179(43.7) | 226(46.7) | |
| AC | 171(41.7) | 216(44.6) | ||
| CC | 60(14.6) | 42(8.7) | ||
| 显性模型 | AA | 179(43.7) | 226(46.7) | |
| AC+CC | 231(56.3) | 258(53.3) | ||
| 相加模型 | AC | 171(41.7) | 216(44.6) | |
| AA+CC | 239(58.3) | 268(55.4) | ||
| 隐性模型 | CC | 60(14.6) | 42(8.7) | |
| AC+AA | 350(85.4) | 442(91.3) | ||
| 等位基因 | A | 529(64.5) | 668(69.0) | |
| C | 291(35.5) | 300(31.0) |
注：AMI：急性心肌梗死
将AMI作为因变量，性别、年龄、吸烟、饮酒、高血压、糖尿病、体质指数、血脂和RNF145基因3个SNP位点的隐性模型作为自变量进行logistic回归分析，结果显示调整混杂因素后，rs17056583位点的CC基因型患AMI风险是GC+GG基因型的2.891倍(OR＝2.891，95%CI：1.608~5.196，P<0.001)。此外，rs7732603的CC基因型患AMI的风险也明显高于AA和AC基因型者(OR＝1.860，95%CI：1.201~2.882，P＝0.005)。
随着社会经济的发展以及人们生活方式的改变，近年来冠心病的发病率和死亡率在不断增加[6]。AMI约占心血管疾病的50%，近年来患病率也呈升高趋势，且患者逐渐趋于年轻化[7]。AMI是由环境因素和遗传因素相互作用引起的多基因疾病，目前至少发现有上百个候选基因的192种SNP与AMI发病有关[8]。在本项研究中，我们对RNF145基因中3个SNP位点进行基因分型，发现新疆维吾尔族人群中RNF145基因SNP与AMI遗传易感性相关。我们的研究表明，RNF145基因可能是降低胆固醇水平和治疗AMI的靶标。
本研究显示，维吾尔族AMI人群中RNF145基因rs17056583位点的C等位基因频率明显高于对照组，且差异有统计学意义。rs7732603位点的基因型和等位基因频率分布差异也有统计学意义。Logistic回归分析结果显示，在调整混杂因素后，维吾尔族人群中rs17056583位点的CC基因型者患AMI的风险明显高于带有GG和GC基因型者，这意味着维吾尔族人群中携带C等位基因者更易发生AMI。对于rs7732603位点来说，维吾尔族人群中携带CC基因型者患AMI的风险也明显低于携带AA和AC基因型者，即携带A等位基因者相比于携带C等位基因者患AMI的风险会明显降低。
在胆固醇合成过程中，RNF145的基本功能是泛素化。基于对泛素化的先前研究，我们发现泛素-蛋白酶体系统参与了所有细胞过程，其中包括调节细胞周期和分裂，参与调节细胞的应激反应，调节细胞表面受体和DNA修复[9]，且该系统的功能主要取决于E3泛素连接酶[10]。然而，我们发现，只有少数E3与胆固醇代谢直接相关。RNF145基因的转录受固醇反应性肝X受体转录因子家族的调节[11,12]。RNF145和gp78一样，都是促进HMGCR降解的主要泛素连接酶，二者有部分功能是重复的，而gp78基因SNP rs2440472位点与冠心病相关[13]。因此，我们推测RNF145基因与AMI之间可能存在相关性。在已发现的所有E3泛素连接酶中，RNF145是唯一用于抑制胆固醇生物合成中所含基因的表达并降低血清胆固醇水平的蛋白质。因此，RNF145是调节脂质代谢的重要蛋白质，或许可以通过降低血脂水平进而预防AMI的发生。由此可见，RNF145基因多态性与心血管疾病关联密切。总之，RNF145基因多态性在新疆地区维吾尔族人群中与AMI的发生相关，rs17056583的CC基因型可能是维吾尔族人群AMI发病的危险因素。同样，rs7732603维吾尔族人群中携带C等位基因者患AMI的风险也会显著增加。
综上所述，本研究揭示了RNF145基因多态性与AMI存在相关性，这表明RNF145可能在AMI的过程中发挥关键作用。但是，本研究的样本量有限，还需要大规模高质量研究证实，故能否预防和治疗AMI尚需进一步研究和探索。
无
