HDFN的免疫血液学诊断依据包括胎儿/新生儿红细胞表达母体同种免疫性红细胞抗体对应的血型抗原，血浆和红细胞放散液中检出来源于母体的不相容特异性红细胞抗体，红细胞DAT阳性。其中红细胞表达的血型抗原具有阴性排除意义，红细胞放散液中检出母体来源的特异性红细胞抗体具有阳性确诊意义^[1,2,3]。HDFN免疫血液学检测的常规试验包括：对患儿母亲鉴定ABO、RhD血型，并用抗体筛选试剂筛选红细胞不规则抗体；对患儿鉴定ABO、RhD血型，做DAT和放散试验，用A、B型试剂红细胞和抗体筛选试剂红细胞检测血浆和红细胞放散液中是否存在来源于母体，并与患儿红细胞血型不相容的ABO血型抗体和红细胞不规则抗体。本例母婴ABO和Rh血型主要抗原均相合，患儿血浆、红细胞放散液及其母亲血浆与抗体筛选试剂红细胞反应均为阴性，这些检测结果均不支持常见抗体引起的HDFN的诊断。仅患儿DAT阳性提示存在HDFN的可能。但DAT阳性并非HDFN的特异性证据，红细胞自身免疫、药物等因素导致免疫球蛋白非特异性吸附到红细胞膜上，也可导致DAT阳性^[4,5,6,7,8]。根据以上结果，可能会排除HDFN，导致本例患儿漏诊。因此，在进行HDFN的免疫血液学检测时，应考虑到抗体筛选试剂红细胞抗原表达缺陷可能会导致针对低频率血型抗原的抗体漏检。胎儿/新生儿与其母亲不相容的血型抗原遗传自其父亲，对存在不能用其他原因解释的贫血或黄疸新生儿，如患儿或其母亲与患儿父亲ABO血型相容，用患儿血浆、红细胞放散液或其母亲血浆与患儿父亲红细胞反应，可检出因抗体筛选试剂红细胞抗原表达缺陷，导致HDFN的抗体漏检。本例患儿及其父母ABO血型相同，患儿父母DAT均阴性，患儿血浆、红细胞放散液和其母亲血浆与患儿父亲红细胞反应均为阳性，可诊断患儿为由ABO血型以外的血型抗体引起的HDFN。患儿母亲DAT阴性可初步排除母亲红细胞自身抗体进入患儿体内引起DAT阳性的可能，患儿父亲DAT阴性说明患儿血浆、红细胞放散液和患儿母亲血浆与患儿父亲红细胞反应的凝集为特异性凝集。

由于抗体鉴定谱细胞价格贵，有效期短，绝大多数医疗机构的免疫血液学实验室并没有常规配置抗体鉴定谱细胞。因此对于由ABO血型以外的血型抗体引起的HDFN，通常不能立即鉴定出引起HDFN的特异性抗体。鉴于本例HDFN患儿的胆红素水平快速升高达到换血治疗的指征^[9]，且经光疗和IVIG治疗未改善，因此在鉴定出引起HDFN的特异性抗体之前，即选择ABO及RhD血型均与患儿相同，采用可检出IgG抗体的方法与患儿血浆、红细胞放散液配血相合的红细胞和ABO血型与患儿相容的血浆紧急实施了换血治疗，大大缩短了患儿暴露于高胆红素血症和严重贫血状态的时间。对患儿换血前后Hb和TBIL的检测结果及临床监护情况显示，该换血治疗策略是安全、有效的。本例患儿血浆、红细胞放散液和其母亲血浆与抗体鉴定谱细胞反应均检出了IgG抗-Di^a，进一步鉴定发现患儿及其父亲为Di^a血型抗原阳性，但患儿母亲为Di^a阴性。因此诊断患儿为抗-Di^a引起的HDFN。

Diego血型系统于1955年被发现，目前国际输血协会（International Society of Blood Transfusion, ISBT）正式命名的Diego血型系统抗原有22个，均位于红细胞膜蛋白AE1（band 3）上，源自AE1基因单核苷酸的多态性。包括3组低/高频率相对应的Di^a/Di^b、Wr^a/Wr^b、Wu/DISK和16种低频率抗原^[10]。Diego血型系统中具有临床意义的抗体有抗-Di^a、抗-Di^b和抗-Wr^a[11]。国内外已有抗-Di^a引起的HDFN^[12,13,14]和免疫溶血性输血反应（immune hemolytic transfusion reaction, IHTR）^[15,16]的报道。Di^a的频率具有显著的人群和地区差异^{[10,11,17,18]}，在高加索人和非洲裔黑种人中不具有多态性（频率<0.1%）。由抗-Di^a引起的HDFN在欧美地区十分罕见而关注度较低。因此，英国血液学标准委员会（British Committee for Standards in Haematology, BCSH）推荐的商品化抗体筛选试剂红细胞必须表达的抗原^[19]和美国食品药品管理局（Food and Drug Administration, FDA）批准的商品化抗体筛选试剂红细胞必须表达的抗原^[20]都不包括Di^a。Di^a在东亚地区和美洲原住民人群中具有多态性（频率为3.0%~10.0%），在中国人群中的频率为5.19%^[21]，Di^a抗原阴性的中国人群接受Di^a抗原免疫的概率较高。而我国还没有建立抗体筛选试剂红细胞的质量标准。目前国内使用的商品化抗体筛选试剂红细胞大多数不表达Di^a抗原^[22]，抗-Di^a引起的HDFN很容易被漏诊，这可能是抗-Di^a引起的HDFN在中国报道极少的主要原因。抗-Di^a引起的HDFN病例报道极少，通常未将抗-Di^a列为可引起严重HDFN的高风险抗体^[2,3]。本例患儿母亲血浆中的IgG抗-Di^a效价达128，患儿生后严重贫血，生后数小时胆红素水平升高达到换血指征，而且接受光疗后仍继续加重，若不及时给予换血治疗，很可能发展为胆红素脑病。提示抗-Di^a可引起十分严重的HDFN，应予高度重视。

与Diego血型系统Di^a抗原具有相似地区差异的还有MNSs血型系统的Mur抗原。Mur在全球大多数地区人群中都很罕见，但在东亚地区则相对常见^[11]，已有在亚洲人群中由抗-Mur引起的严重HDFN病例的报道^[3,23]。Mur在中国人群的频率为5.76%^[24]。而我国使用的商品化抗体筛选试剂红细胞也多不表达Mur抗原^[22]，因此抗-Mur引起的HDFN也极易漏诊。鉴于我国Di^a和Mur抗原频率较高，而抗-Di^a和抗-Mur均可引起严重的HDFN，提示我国不适合采用欧洲和美国商品化抗体筛选试剂红细胞的抗原谱，而应建立适合我国的抗体筛选试剂红细胞抗原谱和质量标准，有必要将Di^a和Mur纳入我国抗体筛选试剂红细胞抗原谱。但目前我国没有建立抗体筛选试剂红细胞抗原谱，对存在不能用其他原因解释的贫血或黄疸的新生儿，且患儿或其母亲与患儿父亲ABO血型相容时，应用患儿血浆、红细胞放散液或其母亲血浆与患儿父亲红细胞反应，避免因抗体筛选试剂红细胞抗原表达缺陷而导致HDFN误诊。针对低频率抗原的红细胞抗体引起的严重HDFN患儿，很容易从ABO血型相容的血液中找到配血相合的血液，若需换血治疗无须等待特异性抗体的鉴定结果。