检测和分析获得性纯红细胞再生障碍（PRCA）患者T淋巴细胞亚群的分布，评估患者免疫功能状态及环孢素对T淋巴细胞亚群的影响。
采用流式细胞术对22例获得性PRCA患者和22名健康对照者外周血标本进行T淋巴细胞亚群检测，检测PRCA患者在应用以环孢素为基础的免疫抑制方案治疗3个月前后的淋巴细胞亚群变化。
22例患者治疗后17例血象恢复正常（3例骨髓象也恢复正常），总有效率95.5 %（21/22）（基本治愈3例，缓解14例，进步4例，无效1例）。获得性PRCA患者组的Th细胞（CD3+ CD4+）、Th/Ts比值均低于健康对照组，Ts细胞（CD3+ CD8+）的表达高于健康对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗3个月后Th细胞、Th/Ts比值较前升高，Ts细胞较前治疗下降，差异均有统计学意义（均P<0.05 ）。
获得性PRCA患者T淋巴细胞亚群失调导致其细胞免疫功能紊乱，环孢素可改善获得性PRCA患者的T淋巴细胞亚群失衡，是治疗该疾病的有效方法之一，疗效显著，且不良反应较轻。
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纯红细胞再生障碍（PRCA）是以骨髓单纯红系造血衰竭或紊乱为主要特征的异质性疾病，分为先天性及获得性。获得性PRCA发病机制多被认为与异常免疫相关，目前研究证明T细胞免疫异常介导的红系损伤与PRCA的发病有很大关系。治疗上，一线用药为免疫抑制剂环孢素（CsA ），有效率可达65 %左右[1]。目前有关CsA对获得性PRCA患者免疫功能影响的研究报告较少。检测和分析淋巴细胞亚群的分布对于评估患者免疫功能状态、判断药物疗效均有一定的意义。我们采用流式细胞术检测获得性PRCA患者在应用以CsA为基础的免疫抑制方案治疗前后的淋巴细胞亚群，探讨患者淋巴细胞亚群的变化，并观察CsA治疗对机体免疫功能的影响。
选择2002年10月至2013年5月在我院住院的资料完整的获得性PRCA患者22例，男9例，女13例；汉族18例，维吾尔族4例，平均年龄54岁（25～ 78岁），均为慢性PRCA，诊断时主要表现为贫血的症状及相应体征，无出血、发热，无肝、脾大及淋巴结肿大，血常规：红细胞计数0.8×1012/L~ 1.64×1012/L，血红蛋白含量23~ 66 g/L，平均45.3 g/L，网织红细胞均<0.01，白细胞及血小板计数均正常，骨髓形态：22例患者红系细胞增生均极度低下，其中7例为0，15例在0.001~ 0.040。诊断标准符合文献[2]。健康对照组选取我科22名健康体检者。两组在性别、年龄方面差异均无统计学意义（P>0.05）。
CsA起始剂量为每天3 mg/kg，1次／12 h，口服。同时给予十一酸睾酮胶丸（商品名：安特尔） 40 mg/次，3次/d，输红细胞对症支持治疗。治疗期间监测CsA血药浓度、血红蛋白变化，以分析CsA的最低有效浓度，同时观察其不良反应。1个月复查肝、肾功能1次，若发现有肝、肾损害者即相应减少CsA剂量。随访时间3～96个月。
所用溶血素、淋巴细胞亚群检测试剂盒及流式细胞仪（FACS Calibur）均为美国BD公司产品。全部患者于治疗前及治疗后3个月进行淋巴细胞亚群检测。抽取患者静脉血2 ml，加0.4 ml乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝。取100 μl上述抗凝血，用Simule Test试剂（含双色荧光素标记的CD3、CD4、CD8、CD16、CD56相关单克隆抗体）直接标记全血细胞，4 ℃避光培养20 min后加入2 ml红细胞裂解液，混匀后室温培养10 min，PBS洗涤两遍。最后加入200 ml PBS混匀，立刻上机检测。
参照文献[2]标准判断疗效，观察治疗后基本治愈率、缓解率、进步率、有效率、不良反应发生率。
应用SPSS 17.0软件进行统计分析，计量资料服从正态分布，用均数±标准差（
±s）表示，采用t检验进行两组间比较。以P<0.05为差异具有统计学意义。
22例患者中，17例血象恢复正常，其中3例骨髓象同时恢复正常，14例骨髓象红系增生仍减低，但较治疗前有所上升。基本治愈3例，缓解14例，进步4例，无效1例，总有效率95.5 %（21/22）。不良反应：多毛症占81.8 %（18例），齿龈增生63.6 %（14例），肝轻微损害22.7 %（5例），肾功能改变13.6% （3例）。经对症治疗后不良反应均可控制。
获得性PRCA患者组的Th细胞（CD3+ CD4+）表达、Th/Ts比值均低于健康对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；Ts细胞（CD3+ CD8+）的表达高于健康对照组，差异有统计学意义（P<0.05 ）。两组间NK细胞的表达差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。
获得性纯红细胞再生障碍（PRCA）患者组与健康对照组T细胞亚群的比较（
±s）
获得性纯红细胞再生障碍（PRCA）患者组与健康对照组T细胞亚群的比较（±s）
| 组别 | 例数 | Th细胞（%） | Ts细胞（%） | Th/Ts | NK细胞（%） | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| PRCA组 | 22 | 34.64±3.84 | 30.50±2.82 | 1.19±0.21 | 11.25±1.82 | |
| 健康对照组 | 22 | 45.05±2.13 | 20.18±1.87 | 2.24±0.43 | 10.26±1.34 | |
| t值 | 9.18 | 14.29 | 12.27 | 1.29 | ||
| P值 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.37 | ||
治疗3个月后Th细胞表达、Th/Ts比值较治疗前升高，Ts细胞表达较治疗前下降，差异均有统计学意义（均P<0.05 ），治疗前后NK细胞的表达差异无统计学意义（P>0.05）（表2）。
获得性纯红细胞再生障碍（PRCA）患者环孢素治疗前及治疗后3个月T细胞亚群的比较（
±s ）
获得性纯红细胞再生障碍（PRCA）患者环孢素治疗前及治疗后3个月T细胞亚群的比较（±s ）
| 时间 | 例数 | Th细胞（%） | Ts细胞（%） | Th/Ts | NK细胞（%） | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 治疗前 | 22 | 34.64±3.84 | 30.50±2.82 | 1.19±0.21 | 11.25±1.82 | |
| 治疗后 | 22 | 39.90±3.77 | 23.03±2.59 | 1.92±0.37 | 11.98±1.99 | |
| t值 | 4.60 | 5.87 | 6.87 | 1.15 | ||
| P值 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.62 | ||
PRCA是以骨髓红系造血衰竭为特征的一组异质性综合征[3]。其血象为正常红细胞性或轻度大红细胞性贫血，网织红细胞明显减少（0.03~ 0.05 ）或缺如，外周血白细胞和血小板水平基本正常。骨髓象示骨髓增生活跃或减低，粒红比值增加，红系增生减低，各阶段有核红细胞明显减少（0.03~ 0.05）[4]。目前认为其发病机制为T淋巴细胞介导免疫损伤[5]。Fujiao和Tsuda[6]发现Th2细胞与强烈免疫和变态反应相关，推测Th2为促进抑制红系祖细胞抗体产生的T细胞亚群，PRCA患者外周血CD3+ CD8+细胞比例明显增高，克隆性T细胞增殖抑制红系造血，还证明这些细胞具有克隆性增殖的特点。本研究通过流式细胞术检测显示，获得性PRCA患者组的Th细胞（CD3+ CD4+）表达、Th/Ts比值均低于健康对照组（P<0.05）；Ts细胞（CD3+ CD8+）的表达高于健康对照组（P<0.05 ），与王爱清等[7]的研究结果一致，表明PRCA的发病与T淋巴细胞介导的细胞免疫有密切关系。也有研究发现PRCA合并胸腺瘤患者外周血CD4+/CD8+比例倒置，胸腺组织中也有CD8+细胞增生，在体外骨髓集落培养中加入患者CD8+细胞后发现红系祖细胞生长受到抑制，并且这种抑制作用呈剂量依赖性。Masuda等[8]分别使用聚合酶链反应和Southern印迹法证实，在PRCA患者外周血及骨髓T淋巴细胞中均存在TCR-β重排，同时也发现淋巴细胞CD4+/CD8+亚群的比例发生倒置，是由免疫表型为CD3+ CD8+的T细胞克隆性增殖所致。
CsA是一种环多肽，是以T细胞为主要作用靶点的免疫抑制剂[9]。CsA可影响T淋巴细胞增殖、分化，抑制辅助T细胞和抑制性T细胞的扩增，并且抑制T淋巴细胞产生多种造血抑制因子，还具有体液及细胞双重的免疫抑制效应。其治疗PRCA的有效性已获公认，总有效率可达65％左右[10]。CsA治疗上取得的成功也提示细胞免疫机制在PRCA中起了主要作用。本组22例患者CsA治疗后，17例血象恢复正常，其中3例骨髓象也恢复正常，14例骨髓象红系增生仍减低，但较治疗前有所上升，总有效率95.5 %。治疗3个月后Th细胞表达、Th/Ts比值较前升高，Ts细胞表达较前下降，差异均有统计学意义（均P<0.05），这在一定程度上提示PRCA的发生与T细胞免疫介导的造血抑制有关，这与张学美等[11]研究是一致的。总之，CsA是治疗PRCA的有效方法之一，疗效显著且不良反应较轻。
