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骨髓增殖性肿瘤120例JAK2 V617F基因突变的临床分析
白血病·淋巴瘤, 2015,24(7) : 433-436. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9921.2015.07.014
摘要
目的

探讨JAK2 V617F基因突变在骨髓增殖性肿瘤（MPN）患者中的发生率及临床意义。

方法

采用骨髓细胞学和活组织检查方法分析120例患者的骨髓病理状况，监测费城染色体（Ph染色体）和bcr-abl融合基因。从患者骨髓抽提DNA，采用荧光定量PCR技术检测JAK2 V617F基因突变。

结果

所有患者均呈现出MPN各自类型的典型特征。Ph染色体和bcr-abl融合基因检测均为阴性。120例MPN患者中JAK2 V617F基因突变的阳性率为66.7 %（80/120），其中真性红细胞增多症（PV）为72.7 %（16/22），原发性血小板增多症（ET）为66.0 %（62/94），4例原发性骨髓纤维化（PMF）患者中2例阳性。JAK2 V617F突变阳性PV患者的外周血白细胞计数（P=0.001）和血小板计数（P=0.010）均高于阴性患者；JAK2 V617F突变阳性ET患者的白细胞计数高于阴性患者（P=0.006）；PMF中JAK2 V617F突变阳性和阴性患者间各项指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。

结论

JAK2 V617F基因突变检测有助于bcr-abl阴性MPN的诊断和鉴别诊断，使患者能够在早期被发现和治疗。

引用本文: 董莹, 朱华锋, 侯莉萍, 等.  骨髓增殖性肿瘤120例JAK2 V617F基因突变的临床分析 [J] . 白血病·淋巴瘤, 2015, 24(7) : 433-436. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9921.2015.07.014.
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骨髓增殖性肿瘤（myeloproliferative neoplasms，MPN）是一组发生在干细胞水平的异质性疾病，是由一系或多系分化相对成熟的骨髓细胞不断克隆性增殖所导致的一组肿瘤性疾病的统称。2008年世界卫生组织（WHO）将这组疾病分为真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）、原发性骨髓纤维化（PMF）、慢性粒细胞白血病（CML）以及其他非典型的MPN，并将JAK2 V617F阳性纳入bcr-abl阴性MPN（包括PV、ET、PMF）的诊断标准中，可见JAK2 V617F基因突变对于MPN有着重要的临床价值。在MPN中，除了JAK2 V617F突变以外，还有Exon 12、MPL、CALR等突变[1,2,3]。现对我院120例MPN患者JAK2 V617F基因突变与疾病类型进行回顾性分析，以揭示JAK2 V617F基因突变在MPN诊断中的价值，探索其在预后和治疗中的意义。

1　资料与方法
1.1　一般资料

2013年10月至2014年10月初诊为MPN并进行JAK2 V617F基因突变检测的患者120例，中位年龄49岁（13~ 82岁），其中男性59例，女性61例；PV 22例，ET 94例，PMF 4例。

1.2　一般实验室检查

选择髂后上棘行骨髓穿刺，抽取骨髓液和骨髓组织用于细胞形态学和骨髓活组织检查。进行全血细胞计数和外周血形态分类、费城染色体（Ph染色体）及bcr-abl融合基因等检查。

1.3　JAK2 V617F基因突变检测

所有患者均抽取骨髓2 ml，乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，4 ℃保存，使用血液基因组DNA提取试剂盒从骨髓中提取基因组DNA，并以该DNA为模板，采用Taqman探针实时荧光定量PCR技术进行基因扩增，检测JAK2 V617F基因的突变情况。PCR条件：42 ℃ 5 min, 94 ℃预变性5 min；94 ℃变性15 s, 60 ℃延伸1 min，共40个循环。

1.4　统计学方法

应用SPSS 16.0软件对数据进行统计学分析，白细胞计数、血红蛋白、血小板计数以均数±标准差（±s）表示。计量资料两组间比较用t检验，以P< 0.05为差异有统计学意义。

2　结果
2.1　骨髓检查结果

120例患者Ph染色体和bcr-abl融合基因检测结果均为阴性。22例PV患者中，骨髓活组织检查显示骨髓增生活跃或明显活跃，粒、红及巨核细胞系均增生，红系增生尤为显著；其中20例（91 %）骨髓涂片示红细胞分布密集，血小板成丛或散在可见。94例ET患者中，骨髓活组织检查显示骨髓增生活跃，骨髓涂片显示巨核系统增生。4例PMF患者均呈现骨髓穿刺"干抽"现象，骨髓活组织检查显示网状纤维或胶原纤维明显增生；骨髓涂片有核细胞增生低下，出现泪滴状红细胞。

2.2　JAK2 V617F基因突变检测结果

120例MPN患者中80例（66.7 %）存在JAK2 V617F基因突变，其中PV患者的突变阳性率为72.7 %（16/22），ET患者突变阳性率为66.0 %（62/94），4例PMF患者中突变阳性2例。

2.3　JAK2 V617F基因突变与外周血细胞计数的关系

JAK2 V617F基因突变阳性PV患者初诊时的白细胞计数和血小板计数均高于阴性患者（均P< 0.05）（表1）。突变阳性ET患者初诊时的白细胞计数高于阴性患者（P<0.05）（表2）。在PMF患者中，三项指标的差异均无统计学意义（均P>0.05）（表3）。

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表1

JAK2 V617F基因突变阳性与阴性真性红细胞增多症患者外周血细胞计数比较

表1

JAK2 V617F基因突变阳性与阴性真性红细胞增多症患者外周血细胞计数比较

组别例数白细胞计数（×109/L，±s）血红蛋白（g/L，±s）血小板计数（×109/L，±s）
JAK2 V617F阳性1615.52±7.01217.50±23.19480.50±253.44
JAK2 V617F阴性68.22±2.06201.82±11.96248.67±108.35
t值-7.5721.421-4.030
P值0.0010.2150.010
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表2

JAK2 V617F基因突变阳性与阴性原发性血小板增多症患者外周血细胞计数比较

表2

JAK2 V617F基因突变阳性与阴性原发性血小板增多症患者外周血细胞计数比较

组别例数白细胞计数（×109/L，±s）血红蛋白（g/L，±s）血小板计数（×109/L，±s）
JAK2 V617F阳性6216.03±12.45130.48±25.84855.26±435.38
JAK2 V617F阴性329.96± 3.24120.78±31.301 053.75±376.78
t值-2.9841.798-1.982
P值0.0060.0820.056
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表3

JAK2 V617F基因突变阳性与阴性原发性骨髓纤维化患者外周血细胞计数比较

表3

JAK2 V617F基因突变阳性与阴性原发性骨髓纤维化患者外周血细胞计数比较

组别例数白细胞计数（×109/L，±s）血红蛋白（g/L，±s）血小板计数（×109/L，±s）
JAK2 V617F阳性29.56±3.80115.00± 5.66179.50±208.60
JAK2 V617F阴性23.62±1.1582.00±12.73119.50± 78.49
t值-0.7442.5380.296
P值0.5810.2390.817
3　讨论

MPN是由于造血干细胞恶性增殖导致的疾病，PV、ET、PMF三者构成了经典的bcr-abl阴性的MPN，分别以红细胞增多、血小板增多和骨髓纤维化为主要特征，病程包括血细胞计数异常、肝脾大、栓塞、出血等，最早的确诊是通过临床特征进行定义和分类的。JAK2基因位于9号染色体短臂2区4带，是14号外显子1 849位鸟嘌呤（G）突变为胸腺嘧啶（T），导致JAK2蛋白激酶样结构域的617位缬氨酸转变为苯丙氨酸，该突变导致一系列调节细胞生长的细胞因子过度生成并最终引起疾病的发生[4]。JAK2 V617F基因突变的发现从根本上揭示了bcr-abl阴性MPN的致病机制。2008年WHO将检测JAK2 V617F突变作为MPN确诊的分子标志物，对诊断具有非常重要的指导意义[2]。

2005年5个研究小组同时发现了90%～95％的PV患者、50%～60％的ET患者和55%～60％的PMF患者体内存在JAK2 V617F突变[5,6,7,8,9]，2008年WHO对JAK2 V617F的突变比例也是如此阐述的[2,10]。而2015年Deadmond和Smith-Gagen[11]研究发现，与之前的研究相比，ET患者中JAK2 V617F基因突变的发生率升高了31 %，PV患者中发生率降低了21 %。本研究结果显示，120例MPN患者中80例（66.7 %）存在JAK2 V617F基因突变，其中PV突变率为72.7 %（16/22），ET为66.0 %（62/94），4例PMF中2例突变。由此可见，PV和PMF患者JAK2 V617F突变的发生率与Deadmond和Smith-Gagen[11]报道的基本一致，而ET患者的发病率与WHO基本一致。我们认为产生这种结果的主要原因有：2001年关于PV和ET的定义有偏颇，导致ET比例偏低，PV则偏高；某些特殊环境下，MPN各亚型之间可以相互转化；东方人与西方人遗传背景有差异。

有研究发现，JAK2 V617F基因突变与疾病的进程和预后相关，与JAK2 V617F突变阴性患者相比，突变阳性PV患者转化为骨髓纤维化的可能性更大，突变阳性PV患者和ET患者均有白细胞计数升高、出血和血栓形成倾向；JAK2 V617F基因含量高的PMF患者的生存期更短[12,13,14]。因此，对血细胞升高，但没有达到WHO关于MPN诊断标准的患者进行JAK2V617F突变检测，有可能起到早期诊断、早期治疗及预防并发症的作用[15]。

目前，对JAK2 V617F突变的检测方法是等位基因特异性实时荧光PCR (AS-qPCR），其灵敏度较低，受环境因素影响较大[2]，而第二代测序，即高通量测序技术的迅速发展，将会弥补AS-qPCR的不足，并能够检测更低比例的基因突变（如CALR基因），提高了临床诊断的准确度，具有更好的临床应用价值[16,17,18,19,20]。

综上所述，在短短的近十年内，随着MPN分子生物学研究的快速发展，对疾病的诊断、预后转归的预测取得了较大进步，JAK/STAT抑制剂的研发将为患者提供高效、特异的分子靶向治疗。芦可替尼（ruxolitinib）是目前唯一经美国食品与药品监督管理局和欧盟委员会批准的药物，其他抑制剂如Peg型干扰素α-2a、pacritinib、momelotinib、SAR302503、CEP701、CYT387、SB1518等也处于不同试验阶段[21,22,23,24]，有望成为临床药物，为MPN患者的治疗找到新的突破口。

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骨髓增殖性肿瘤
JAK2V617F基因突变
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