探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体／人类白细胞抗原（KIR/HLA）受配体模式对接受单倍型造血干细胞移植患者预后的影响。
采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）方法，对5对HLA半相合供／受者移植前进行KIR与HLA分型，同时分析KIR/HLA的受配体模式。
5例受者均获得完全、持久供者干细胞植入。中性粒细胞计数≥0.5×109/L的中位时间为13 d，血小板计数≥ 20×109/L的中位时间为18 d。1例KIR2DS1阳性患者造血重建较快、急性移植物抗宿主病发生率较低、移植后感染较轻。
在单倍型造血干细胞移植中，分析供受者KIR及其配体可为供者优化选择提供分子生物学依据。
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目前，异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后患者的免疫状态、免疫重建及其与移植物抗宿主病（GVHD）和移植物抗白血病（GVL）效应的关系已成为国内外学者研究的焦点。文献[1]报道，当供受者杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）／人类白细胞抗原（HLA）受配体不相合后，供者活化性KIR传递的激活信号不再被抑制性KIR抑制后，供者的NK细胞被激活，攻击白血病细胞，介导GVL效应，减少GVHD的发生，但KIR对于移植的影响尚不完全清楚，深入研究KIR显得至关重要。回顾性分析我科2010年5月至2014年6月5例接受单倍型HSCT患者的临床资料，初步探讨KIR/HLA受配体模式对HSCT的影响。
5例患者均为急性髓系白血病（AML），其中男性3例，女性2例，中位年龄21.4岁（12~ 39岁）；M2 2例，M4 1例，M5 2例。所有患者均参照文献[2]进行诊疗，均有移植适应证[3]。供者来源：父母2例，同胞兄妹3例。供受者血型情况：ABO血型全相合2例，次要不合3例。移植前第1次完全缓解（CR1）4例，第2次完全缓解（CR2）1例。
供受者均用基因序列分析（PCR-SBT）（美国Atria公司）进行HLA-A、HLA-B、HLA-CW、HLA-DRB1、HLA-DQB1高分辨基因分型，用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）（美国Invitrogen公司）进行KIR基因分型。根据KIR2DS1受体表达与否，将健康供者分为KIR2DS1阳性组和KIR2DS1阴性组。
所有患者均采用粒细胞集落刺激因子（G-CSF）动员的骨髓加外周血干细胞混合移植方式，ABO血型次要不合者用离心方法去除血浆。
所有患者均采用改良白消安（Bu）／环磷酰胺（Cy）+抗胸腺细胞球蛋白（ATG）方案（阿糖胞苷4 g/m2，-10天至-9天，Bu0.8 mg/kg，每6 h，-8天至-6天，Cy 1.8 g/m2，-5天至-4天，ATG 2.5 mg/kg，-5天至-2天，司莫司汀250 mg/m2，-3天）。
急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防采用加强的联合免疫抑制方案环孢素A(CsA）+吗替麦考酚酯（MMF）+短程甲氨蝶呤（MTX）+兔抗人ATG；肝静脉闭塞病（VOD）的预防采用前列腺素E1；出血性膀胱炎（HC）的预防采用美司钠、NaHCO3碱化水化尿液；卡氏肺囊虫病（PCP）的预防采用复方磺胺甲恶唑片；巨细胞病毒（CMV）血症的预防采用更昔洛韦+人血丙种免疫球蛋白。
在连续3 d中性粒细胞计数≥0.5×109/L及连续7 d不输血小板的情况下血小板计数≥20×109/L为达到植入指标；采用STR-PCR结合毛细管电泳技术检测+7天、+14天、+21天、+30天患者外周血中供受者嵌合状态，定期复查患者骨髓细胞形态学、融合基因、微小残留病（MRD）以监测疾病复发情况。
4例患者发生恶心、呕吐，经对症处理后消失，所有患者均无发热、口腔溃疡、肝肾功能异常、VOD等并发症。
移植后所有患者均获得造血重建，中性粒细胞计数≥0.5×109/L的中位时间为13 d (10~ 15 d），血小板计数≥20×109/L的中位时间为18 d(9~ 22 d），输注供者单个核细胞中位数为7.8× 108/kg(7×108～12×108/kg），CD34+细胞中位数为3.1×106/kg (4×106～7×106/kg）。移植后监测PCR-STR水平，5例患者于+7天、+14天、+21天、+30天均显示持续完全供者细胞嵌合状态。
KIR2DS1阴性组（4例）全部受者发生aGVHD，其中Ⅰ度3例，Ⅳ度1例；肺部感染3例，胃肠道感染2例，肛周感染3例，EB病毒（EBV）血症2例，CMV血症2例，HC 1例。KIR2DS1阳性组（1例）受者发生Ⅰ度aGVHD及上呼吸道感染，未发生EBV及CMV血症。
随访截至2014年7月31日，中位随访6个月（3~ 36个月），5例患者均无病生存。骨髓象、融合基因及MRD无明显异常，目前仍在继续随访中。
文献[4]报道，有些HLA全相合患者移植后依旧出现排斥反应，而有些HLA不相合者移植后可获得长期无病生存，表明仅检测HLA已不能满足临床需要。Ruggeri等[5]报道112例高危AML患者在半相合HSCT中，异源激活的NK细胞可控制白血病复发、促进移植物存活、改善患者生存。对行单倍体移植的AML患者回顾性分析表明，约90％有供者NK细胞异源反应性的移植比无供者的移植具有明显优势[4]。
目前对于激活性KIR与移植预后的关系尚存在争议，国外一些移植病例中供受者双方KIR/HLA-Cw错配，供者若含有激活型KIR2DS1基因，则移植后GVL效应更加明显，患者可获得较高的无病生存率[6]。Sivori等[7]发现供者表达KIR2DS1可能会大大增强异源反应性NK细胞抑制GVHD、促进植入的能力。而梁赜隐等[8]报道供者KIR2DS1阳性／受者HLA-C2阴性预示着生存期缩短及aGVHD发生率增高，移植相关死亡率增高。我们前期通过体外实验发现活化性KIR2DS1阳性NK细胞对靶细胞的杀伤作用高于KIR2DS1阴性NK细胞，C1组KIR2DS1+NK细胞对C2组靶细胞的杀伤作用高于对C1组及C1/C2组靶细胞的杀伤[9]。本组病例中1例供者KIR2DS1阳性/受者HLA-C2阴性，此患者移植后造血重建较快，且aGVHD发生程度轻，未发生EBV、CMV感染，自2013年9月至截稿时仍未DFS，其远期疗效尚待长期随访验证。
综上所述，供者KIR与受者HLA基因型对单倍体相合HSCT的影响需进行多中心、大样本的研究，并同时结合对活化型KIR的分析来综合评价其在单倍体相合HSCT预后中的意义。
