结核病是危害人类健康的重大传染病之一。2017年，全球范围内结核病新发病例约1 010万，我国是全球30个结核病高负担国家之一，仅次于印度，位居全球第2位^[1]。结核实验室诊断是发现结核病患者的重要途径，抗酸杆菌染色检查价格低廉，操作简单，但敏感度不高；分枝杆菌培养敏感度较高，一直作为结核病实验室诊断的金标准，但其检测周期过长，不能为临床提供时效性检测结果^[2,3]。肺结核病的诊断多依赖气道内痰液或肺泡支气管灌洗液等标本，但仍有部分病例诊断需要穿刺或手术获取的非气道标本。2017年，世界卫生组织(World health organization，WHO)通报的640万例结核病患者中，肺外结核占14%^[1]。因此，对非呼吸道来源的标本进行检测需引起重视。组织、脓液等非呼吸道标本性状复杂，传统的实验室检测不能满足临床诊断需求。鉴于现有细菌学检测方法的诸多不足，我国于2017年重新修订了肺结核诊断标准，此标准将分子生物学诊断阳性作为病原学阳性的诊断依据^[4]。

Xpert MTB/RIF是以半巢式实时荧光定量PCR技术为基础的分子检测技术，自问世以来，在结核病检测中的价值备受关注。2011年，该技术被WHO推荐为检测结核病和耐利福平结核病的方法^[5]。2013年该方法被推荐作为肺结核及肺外结核的诊断工具^[6]。近几年，国内外对Xpert MTB/RIF在非呼吸道标本中的诊断价值进行了大量研究，研究显示Xpert MTB/RIF在组织、脓液等标本中诊断结核疾病具有重要的临床价值^[7,8,9,10]。但是，Xpert MTB/RIF所需设备及试剂价格昂贵，维护成本较高，使得该技术难以广泛开展。

PCR-荧光探针技术原理是采用双重PCR技术和Taqman探针技术相结合，针对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)的特异性序列设计引物和探针，通过监测不同荧光通道的荧光信号变化，检测MTB感染。该技术具有特异性强、灵敏度高、简便易行等优点^[11]。大量研究显示，PCR-荧光探针技术在痰液标本快速诊断结核病中具有重要的临床价值^[12,13]。然而关于PCR-荧光探针技术在组织、脓液等标本中的诊断价值研究较少。

本研究通过比较PCR-荧光探针技术与Xpert MTB/RIF在组织、脓液等非呼吸道标本中对结核病的诊断价值，为临床提供依据。

结核病作为一种传染性疾病，有效快速的诊断是其防控的关键^[15]。临床中虽然大多数使用呼吸道标本，但实际上很多患者呼吸道标本难以获得，只能获得非呼吸道标本。因此应注重对非呼吸道标本的检测^[10]。现有的结核病诊断方法中，涂片抗酸染色镜检具有快速和费用低廉等优点，但对组织、脓液等非呼吸道标本诊断的敏感度很低。液体培养的灵敏度虽然较高，但耗时长，延误疾病的诊断与治疗。随着核酸检测技术的进步，Xpert MTB/RIF越来越得到临床的认可。Denkinger等^[7]对4 461份不同类型样本的分析结果显示，以临床综合诊断为标准，Xpert MTB/RIF在淋巴结及胸水中检测结核病的敏感度分别为81.2%、21.4%，特异度均>98.7%。Maynard-Smith等^[10]分析了6 026份不同类型非呼吸道标本发现：以培养为金标准，Xpert MTB/RIF在不同类型的非呼吸道标本中检测结核病的敏感度为83%，特异度为98%。基于上述研究，WHO推荐Xpert MTB/RIF检测用于非呼吸道标本检测MTB。但是因其设备及试剂价格昂贵，维护成本高，难以在基层单位常规开展。以荧光定量PCR法为代表的分子生物学技术，通过特异性引物和探针双重保证检测结果的准确性，污染率低，快速且可定量，对于满足结核病快速诊断、及时治疗的要求具有重要意义^[16]。

该研究结果显示，以临床确诊为标准，PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度均高于Bactec MGIT 960。PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度和特异度均无统计学意义。ROC曲线分析是评判实验优劣的标准指标^[17]。ROC曲线分析结果显示，PCR-荧光探针法(AUC＝0.768)和Xpert MTB/RIF(AUC＝0.794)对结核病的诊断价值明显高于Bactec MGIT 960(AUC＝0.645)。Xpert MTB/RIF(AUC＝0.794)对结核病的诊断价值高于PCR-荧光探针法。对三种检测方法在各种类型标本中对结核分枝杆菌的检出率进行比较。研究显示，PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF在各类标本的检出率比较，差异均无统计学意义。但Xpert MTB/RIF和PCR-荧光探针法在脓液和组织中的检出率明显高于Bactec MGIT 960，这和国外研究结果是一致的^[18,19]。可能是因为组织和脓液标本中细菌含量较高。特别是淋巴组织，在肺外结核的传播中起重要作用。值得注意的是，PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF在胸水中的检出率均低于Bactec MGIT 960，这与国外研究相似^[17,18]。可能与胸水中菌量少，存在PCR抑制物相关^[20,21]，这还有待于进一步研究加以证实。因为其他类型标本较少，故未做统计分析比较，需要进一步研究。该研究虽然对各类型样本进行研究分析，但仍有不足之处，与国外研究比较，该研究未对标本类型进行详细分类，比如组织类型未详细分为淋巴组织还是其他组织来源。另外对待每一个样本进行针对性的处理来提高检出率也是可进行进一步研究的方向。

对PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF检测MTB进行一致性分析。结果显示，以临床诊断为金标准时，PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF两种检测方法的一致性分析kappa值为0.829，研究表明两种方法的检测性能一致性较好。Xpert MTB/RIF是WHO推荐的用于肺结核及肺外结核快速诊断的分子方法。该研究表明，在非呼吸道标本中，Xpert MTB/RIF对于结核疾病的诊断优于PCR-荧光探针法。但PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF两种检测方法在非呼吸道标本中检测结核病的性能具有较好的一致性，且其所需设备及试剂成本较低，在我国市、县级实验室均可广泛开展。

综上所述，PCR-荧光探针法和Xpert MTB/RIF在非呼吸道不同类型标本中检测结核病的性能具有较好的一致性，由于PCR-荧光探针法经济实用，易于推广，在临床上可先行PCR-荧光探针法进行初筛，对于早期诊断结核病具有重要意义。