构建与鉴定联合调控降钙素基因相关肽(CGRP)和过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)基因的重组载体。
将CGRP基因完整ORF克隆，设计其两端带MluI酶切位点，与TGFP融合蛋白表达单元间用一段柔性链连接，CGRP基因ORF cDNA纯化后与线性化pGFP-V-RS载体连接；按照siRNA的设计原则，设计靶向PPARγ的siRNA寡核苷酸靶序列，将发卡样siRNA寡核苷酸靶序列退火后克隆入线性化pGFP-V-RS载体；再在此载体中克隆入CGRP ORF cDNA片段。进而将此3个质粒做酶切及测序鉴定。
表达CGRP基因的pGFP-V-RS-exCGRP、沉默PPARγ基因表达的pGFP-V-RS-siPPARγ和表达CGRP且同时沉默PPARγ的pGFP-V-RS-siPPARγ-exCGRP，经酶切及测序鉴定的结果与设计均完全一致。
成功构建出联合调控CGRP表达和沉默PPARγ的双基因重组载体。
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股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head，ONFH)是股骨头血液供应遭到破坏，骨的活性成分(骨细胞、脂肪细胞和骨髓造血细胞)死亡的一种病理过程，致残率极高。以成脂分化学说为基础，激素性和酒精性ONFH的发病机制中起关键作用的因素：激素、酒精均可上调细胞内成脂基因PPARγ表达，诱导股骨头内细胞大量成脂分化，导致缺血；并可下调细胞成骨基因表达，抑制成骨分化，骨修复能力变差或缺失。研究证明，降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)为一种与骨代谢和修复密切相关的神经肽基因，可促进成骨细胞增殖与骨修复。过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ，PPARγ)是一种成脂转录因子，主导干细胞成脂分化，若能阻止PPARγ表达，可在一定程度上起到预防ONFH的作用。笔者设想采用促进成骨并抑制成脂的双基因疗法防治ONFH，本研究将CGRP基因与靶向PPARγ siRNA克隆入同一载体，构建联合调控CGRP和PPARγ基因表达的重组载体。
