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肿瘤引流淋巴结(TDLN)是肿瘤抗原首先进入的二级淋巴器官，是决定机体免疫激活抑或免疫耐受的关键初始部位。本研究旨在探讨建立小鼠TDLN的可行性。
将悬浮于20 μl磷酸盐缓冲液(PBS)的体外培养Hepa1-6细胞(6×105个)应用1 ml注射器(注射胰岛素用)注射于6～8周龄C57BL/6J小鼠右后肢足掌皮下，每隔3 d测量肿瘤长径。
第12天处死小鼠，自足踝向上剪开皮肤后予剥脱后肢皮肤，髌骨后方可见局部有脂肪堆积的腘窝，用小弯眼科镊纵向钝性分离，辨别[1]，再轻柔取出足掌肿瘤侧腘淋巴结(TDLN)(勿夹挤淋巴结，以免破碎)。自踝关节剪断双足并称重，每只小鼠肿瘤足重量减去对侧正常足重量测得肿瘤重量。剖检观察肺、肝及腹腔有无转移。统计分析采用t检验。
Hepa1-6细胞接种成瘤率为80% (16/20)，第4天可见足掌中心局部稍隆起[(1.0±0.5) mm]，呈暗紫褐色，第7天和第10天肿瘤长径分别为(2.5±0.5)、(3.5±0.5) mm。第12天长径达(4.5±0.5) mm，肿瘤重量为(0.061 4±0.025 0) g。大体呈椭圆形，质软，中央无明显坏死。未见远处转移。
第12天肿瘤侧腘淋巴结重量为(0.004 2±0.000 2) g，明显大于对侧腘淋巴结[(0.0007±0.000 1) g，P＝0.000]。镜下见淋巴细胞密集，生发中心扩增，无瘤细胞转移。
本研究结果显示Hepa1-6细胞接种足掌后成瘤周期短，成瘤率高，易于操作。TDLN是引流肿瘤的第1站淋巴结，也称前哨淋巴结，多用于研究肿瘤淋巴转移和肿瘤免疫耐受机制。腘淋巴结是足掌的第1站引流淋巴结，数量单个，解剖位置恒定、表浅，标本易于获取。肿瘤引流淋巴结内免疫微环境的改变促进肿瘤细胞的转移[2]，已证实TDLN内高内皮静脉被重构改造成血管、淋巴窦增多扩张和淋巴液增加，而Hepa1-6细胞接种后TDLN内主要表现为淋巴细胞扩增聚集，可能是不同肿瘤细胞株生物学行为的差异。
肿瘤的区域引流淋巴结体积增大现象(无肿瘤细胞淋巴结转移)被称为肿瘤反应性淋巴增生。无肿瘤细胞转移的TDLN可以制备成单细胞悬液，用于流式细胞检测、体外培养、免疫细胞功能测定等。因而Hepa1-6细胞接种小鼠足掌皮下建立的TDLN模型方法可靠，干扰因素少，适用于免疫调控机制的研究。
