研究表明，Toll样受体7（TLR7）在自身免疫性疾病中发挥重要作用，但TLR7在实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中是否通过树突状细胞（DCs）调控辅助性T淋巴细胞17（Th17）的作用机制鲜见报道。
探讨TLR7激动剂CL097处理的小鼠骨髓树突状细胞（BMDCs）对光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP）1-20-特异性Th17细胞的影响。
采用C57BL/6小鼠股骨和胫骨分离小鼠骨髓细胞，将重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）及重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）加入培养基在体外定向诱导BMDCs，于诱导后第6天在培养基中加入5 μg/ml CL097作用8 h，对照组加入PBS，采用实时荧光定量PCR技术检测CL097处理组与对照组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β及转化生长因子-β（TGF-β） mRNA的相对表达量。小鼠腹腔内注射百日咳毒素1 μg，注射后2 h将IRBP1-20与等容积含有结核分枝杆菌HR37RA的完全弗氏佐剂充分乳化后主动免疫C57BL/6小鼠，眼底检查参照Caspi 0~4分的标准进行炎症评分。免疫后第13天取眼球制作病理切片，苏木精-伊红染色后行组织病理学检查，并分离小鼠脾脏及淋巴结中IRBP1-20-特异性T细胞，分别与CL097处理组及对照组的BMDCs共培养5 d，收集细胞，采用实时荧光定量PCR技术检测2个组细胞中IL-17、γ干扰素（IFN-γ）、维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）和T细胞中表达的T盒21转录因子（T-bet）mRNA的相对表达量；采用流式细胞仪检测并分析CL097处理组和对照组Th1与Th17细胞比例的变化。
EAU模型成功建立。实时荧光定量PCR检测结果显示，CL097处理组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β mRNA的相对表达量明显高于对照组，差异均有统计学意义（t=4.560，P=0.045；t=5.476，P=0.032；t=17.240，P=0.003），而TGF-β mRNA相对表达量明显低于对照组，差异有统计学意义（t=10.410，P=0.009）。CL097处理组BMDCs与IRBP1-20-特异性T细胞共培养后，RORγt和IL-17 mRNA相对表达量较对照组明显升高，差异均有统计学意义（t=8.844，P=0.012；t=8.831，P=0.013），而CL097处理组中T-bet、IFN-γ mRNA的相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义（t=2.078，P=0.173；t=1.082，P=0.393）。流式细胞仪检测证实，CL097处理组Th17细胞的百分比为（17.750±4.793）%，明显高于对照组的（10.240±3.173）%，差异有统计学意义（t=4.938，P=0.039），CL097处理组和对照组Th1细胞的百分比分别为（1.123±0.356）%和（1.060±0.384）%，差异无统计学意义（t=2.714，P=0.113）。
TLR7激动剂CL097促进BMDCs分泌与Th17细胞极化相关的细胞因子，并促进IRBP1-20-特异性Th17细胞的分化。
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Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)是天然免疫系统中一类重要的模式识别受体(pattern recognition receptors, PRRs)，能特异性识别病原微生物进化过程中高度保守的病原相关分子模式。迄今为止，在人类已经发现的TLRs有10种(TLR1-10)，而在小鼠中表达的有12种(TLR1-9和TLR11-13) [1,2]，其中TLR7是一种表达于细胞内涵体膜表面的跨膜信号传导受体，广泛存在于体内免疫细胞中，尤以树突状细胞(dendrtic cells, DCs)为主。作为能识别病毒单链RNA以及某些小分子抗病毒化合物的PRRs[3]，TLR7可通过调控DCs的成熟过程、产生细胞因子、刺激初始T细胞向辅助性T淋巴细胞17 (T helper cell 17，Th17)、Th1等不同的细胞亚群分化[4,5]而介导免疫应答反应。近年来的研究表明，Th17细胞与多种自身免疫性疾病，如白癜风[6]、胶原诱导性关节炎[7,8]、实验性自身免疫性葡萄膜炎(exprimental autoimmunal uveitis, EAU)[9,10]等的发病机制密切相关。TLR7在一些自身免疫性疾病的发展过程中可影响Th17细胞的分化，如原发性胆管炎中TLR5、TLR7的激活可通过TLR信号通路诱导Th17细胞的产生，从而增强Th17细胞的免疫应答反应[11]。近来的研究还显示，TLR7激动剂imiquimod诱导的银屑病小鼠背部表皮上白细胞介素-23 (interleukin-23, IL-23)、IL-17A、IL-17F的表达增加，且其脾脏中Th17细胞增多[12]，但目前TLR7对EAU中Th17细胞的作用及调控机制还鲜见报道。CL097属于咪唑并喹啉家族成员，是TLR7的激动剂，本研究主要观察经CL097处理的骨髓树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells, BMDCs)对EAU中光感受器间维生素A类结合蛋白(interphotoreceptor retinoid-binding protein, IRBP) 1-20-特异性Th17细胞的影响，并探讨其可能的分子机制。
