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实验研究
光暴露与人晶状体上皮细胞氧化损伤和凋亡的关系及其机制
中华实验眼科杂志, 2015,33(4) : 300-305. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2015.04.003
摘要
背景

研究表明,光暴露可导致晶状体上皮细胞(LECs)的损伤,与活性氧簇(ROS)的累积和自由基反应有关,其发病机制一直是研究的热点。

目的

研究LECs光损伤的病理机制。

方法

将人LECs系HLEB-3细胞株进行复苏和培养并分为4个组。将20 000 lx光照度的发光二极管(LED)光源置于密封的培养箱并光照培养的细胞6、12、24 h,未行光照射的细胞作为正常对照组。采用流式细胞术检测各组LECs内ROS的表达及细胞凋亡率,分别使用real-time PCR和Western blot技术检测各组细胞中bax和转化生长因子-β2(TGF-β2) mRNA及其蛋白的相对表达水平;采用MTT法检测并比较正常对照组与光照24 h组细胞的增生值(A570)。

结果

正常对照组培养的细胞排列紧密,光照后随着时间延长,细胞肿胀,细胞间隙增宽。LECs内ROS平均荧光强度(MFI)、早期凋亡率、总凋亡率随光照时间的延长逐渐上升,各组间总体比较差异均有统计学意义(F=8.276,P=0.036;F=27.878,P=0.006;F=9.333,P=0.028)。光照6 h组、12 h组和24 h组,bax mRNA的相对表达量较正常对照组分别升高(1.45±0.33)、(5.45±2.58)和(15.86±3.93)倍,TGF-β2mRNA的表达分别升高(1.22±0.12)、(1.79±0.38)和(4.01±0.93)倍,4个组间总体比较差异均有统计学意义(F=13.679,P=0.023;F=13.320,P=0.024)。光照24 h组bax和TGF-β2蛋白的表达量分别较正常对照组升高约1.85倍和2倍。正常对照组细胞增生值(A570)为0.959±0.058,明显高于光照24h组的0.897±0.093,组间差异有统计学意义(t=-3.130,P=0.003)。

结论

20 000 lx的光照可导致体外培养人LECs的氧化损伤和凋亡,bax和TGF-β2可能参与光诱导人LECs的损伤过程。

引用本文: 魏树瑾, 南莉, 汤欣, 等.  光暴露与人晶状体上皮细胞氧化损伤和凋亡的关系及其机制 [J] . 中华实验眼科杂志, 2015, 33(4) : 300-305. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2015.04.003.
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随着对白内障发病机制研究的逐渐深入,国内外学者逐渐认识到,多种损伤因子可通过不同的途径和机制导致白内障,但是这些因子大多是通过共同的中间产物––自由基损伤晶状体的,因此研究自由基在白内障发生和发展过程中的作用对临床上防治白内障具有重要意义。研究表明,光暴露诱发的活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)自由基反应导致的晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)的凋亡与年龄相关性白内障的发生关系密切,而目前有关LECs光损伤的模型报道较少,成功建立LECs光损伤模型有助于对白内障的发生机制进行更深入的研究。转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)是生物体内调节细胞增生、分化、迁移和凋亡的重要细胞因子,在白内障发生过程中起着重要的作用。TGF-β2信号传导通路可能是H2O2诱导LECs凋亡的起始信号,阻断TGF-β2信号传导通路可抑制H2O2诱导的人LECs的凋亡。本研究拟观察光损伤对人LECs增生和凋亡的影响,探讨LECs光损伤与ROS损伤的关系及其机制。

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