实验研究
人脂肪间充质干细胞向视网膜色素上皮样细胞的诱导分化及其在体应用研究
中华实验眼科杂志, 2015,33(9) : 794-797. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2015.09.006
摘要
背景

目前,干细胞疗法治疗视网膜变性疾病是眼科研究的热点之一。研究已证实骨髓间充质干细胞(MSCs)可以体外诱导分化为视网膜色素上皮(RPE)样细胞,但由于取材困难,临床应用受到了一定的限制。人脂肪间充质干细胞(ADSCs)与MSCs有类似的特性且容易获取,但人ADSCs能够诱导分化为RPE细胞的研究尚不多见。

目的

评估人ADSCs向RPE样细胞诱导分化的可行性及其在体应用的安全性。

方法

将体外培养的第3代人ADSCs接种于6孔板进行培养,12 h后于实验组培养液中加入100 ng/ml表皮生长因子(EGF)、50 μmol/L牛磺酸和5×10–7 mol/L视黄酸进行诱导,常规培养的细胞作为对照组。采用RPE细胞标志物Pan细胞角蛋白(Pan-CK)单克隆抗体进行免疫荧光检测,对诱导的细胞进行鉴定,采用细胞膜示踪剂PKH26标记法示踪诱导细胞,将诱导后的RPE样细胞悬液1 μl注入6只BALB/c裸鼠的右眼玻璃体腔,另6只裸鼠玻璃体内注射等容量PBS。于注射后1个月摘取实验动物右眼眼球,各组中3只眼球用于组织病理学检查,在光学显微镜下观察玻璃体视网膜的形态学改变,另3只眼球在透射电子显微镜下观察玻璃体视网膜超微结构的改变,评估诱导细胞在体应用的安全性。

结果

体外培养的第3代人ADSCs呈细长多角形,生长良好。对照组细胞Pan-CK表达缺失,而诱导细胞的细胞膜Pan-CK表达阳性,呈红色荧光。诱导的细胞经PKH26标记后细胞膜呈红色荧光。诱导的细胞悬液于裸鼠玻璃体内注射后1个月,光学显微镜下可见诱导细胞位于视网膜表面,视网膜各层组织结构排列清晰;透射电子显微镜下可见视网膜神经节细胞(RGCs)细胞膜完整,线粒体结构正常,染色质均匀。

结论

人ADSCs体外诱导后可分化为RPE样细胞,PKH26可对诱导后细胞进行细胞示踪,分化的细胞玻璃体腔注射后短期内未发现视网膜的不良反应。

引用本文: 郭凯, 罗燕, 李涛, 等.  人脂肪间充质干细胞向视网膜色素上皮样细胞的诱导分化及其在体应用研究 [J] . 中华实验眼科杂志, 2015, 33(9) : 794-797. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2015.09.006.
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年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)是老年人盲的主要原因之一,随着社会人口的老龄化,AMD的发病率逐年提高。抗新生血管药物的应用能够缓解AMD的进展,但目前尚未发现明确的治疗手段可以根治AMD。AMD的主要病理改变是视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的损伤,导致光感受器变性。近年来,AMD的细胞疗法成为研究的热点,其研究的关键问题是如何获取足够数量的自体RPE细胞以进行细胞移植,以及细胞治疗后抑制免疫反应和肿瘤发生的可能性。干细胞来源广泛,具有细胞替代、环境再生、旁分泌、无免疫排斥等优势,是目前用于治疗AMD的主要研究方向。骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可以体外诱导分化为RPE样细胞,并具有治疗视网膜退行性疾病的潜在能力,但是其获取时需骨髓穿刺,因此临床应用受到了一定的限制。人脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells,ADSCs)具有与MSCs类似的特性且容易获取,但人ADSCs诱导分化为RPE细胞的研究尚不多见。本研究中对人ADSCs进行体外诱导,观察其表达RPE样细胞特性的可能性,并研究其体内应用的安全性,为视网膜疾病的治疗提供理论基础。

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