实验研究
Radixin shRNA对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用
中华实验眼科杂志, 2015,33(12) : 1089-1094. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2015.12.008
摘要
背景

视网膜新生血管性疾病是多种眼科疾病的病理基础,迄今为止新生血管形成的发病机制尚不完全清楚。研究显示,视网膜新生血管形成过程中radixin表达量明显增加,因此推测在视网膜新生血管相关疾病中抑制或沉默radixin基因有望成为治疗的新方法。

目的

研究radixin小发卡(shRNA)干扰质粒对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠模型视网膜中radixin基因表达的抑制作用,观察其对小鼠视网膜新生管形成的影响。

方法

将64只出生后7 d的SPF级C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组,其中模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠在体积分数(75±2)%的氧环境中饲养5 d,建立OIR动物模型,正常对照组小鼠饲养于正常氧环境下。radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠于出生后第12天分别于玻璃体腔注射1 μg radixin shRNA质粒和对照shRNA质粒,小鼠出生后第17天,对各组小鼠行FD-2000S血管造影术,制备视网膜铺片,观察视网膜血管形态和分布;摘取各组小鼠眼球制备视网膜切片,采用视网膜苏木精-伊红染色法观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核和新生血管;应用免疫组织化学染色法检测radixin在视网膜中的表达分布;分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测radixin mRNA及其蛋白在视网膜组织中的表达情况。

结果

正常对照组小鼠视网膜铺片显示视网膜血管走行正常,模型对照组小鼠视网膜后极部大片状无灌注区,可见大血管迂曲和血管壁荧光素渗漏和新生血管,shRNA质粒组小鼠视网膜可见无灌注区和微血管瘤,而radixin shRNA质粒组小鼠视网膜后极部无灌注区面积较小,血管迂曲和渗漏现象较模型对照组和shRNA质粒组明显减轻。视网膜组织病理学检查显示,模型对照组和shRNA质粒组小鼠视网膜内界膜不连续,可见大量血管内皮细胞核和血管管腔突破内界膜,radixin shRNA质粒组视网膜内界膜形态接近正常对照组,有少量血管内皮细胞核和血管管腔突破内界膜。免疫组织化学检查显示,正常对照组和radixin shRNA质粒组radixin表达弱于模型对照组和shRNA质粒组。正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠视网膜中radixin mRNA的相对表达量分别为1.002±0.043,2.236±0.093,0.556±0.015和2.272±0.096,各组间总体比较差异有统计学意义(F=504.545,P=0.000)。正常对照组、模型对照组、radixin shRNA质粒组和shRNA质粒组小鼠视网膜中radixin蛋白的相对表达量分别为1.000±0.082、1.193±0.021、0.263±0.016和1.235±0.005,各组间总体比较差异有统计学意义(F=753.522,P=0.000)radixin shRNA质粒组radixin mRNA和蛋白的相对表达量较模型对照组和shRNA质粒组明显减低,差异均有统计学意义(均P<0.01)。

结论

Radixin shRNA能有效沉默OIR动物模型视网膜中radixin基因的表达,抑制视网膜新生血管的形成。

引用本文: 王龙梅, 杨侠, 闫琳, 等.  Radixin shRNA对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用 [J] . 中华实验眼科杂志, 2015, 33(12) : 1089-1094. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2015.12.008.
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视网膜病理性新生血管形成是许多眼科疾病发生和发展的病理基础[1],新生血管引起牵拉性视网膜脱离、玻璃体出血、视网膜裂孔等病变,导致视觉功能损害。迄今为止,新生血管形成的具体机制尚不完全清楚。Radixin是ERM(Ezrin/radixin/moesin)蛋白家族中的一员,是膜细胞骨架连接蛋白,属于4.1蛋白超家族[2,3,4]。研究显示,radixin在肿瘤细胞增生和迁移浸润以及血管内皮屏障功能的破坏等病理过程中都起到了重要作用[5,6,7,8,9,10],目前有关radixin与视网膜新生血管形成的关系研究甚少。我们前期的研究发现,小鼠视网膜新生血管形成过程中radixin在视网膜中的表达量升高[11],推测radixin在视网膜新生血管形成过程中可能与血管内皮细胞的生物学行为有关。本研究应用radixin小发卡RNA (short hairpin RNA,shRNA)质粒进行小鼠视网膜新生血管模型的玻璃体腔注射,探讨radixin对血管内皮细胞异常增生和迁移、新生血管形成以及血管通透性的影响,为视网膜新生血管性疾病的靶向治疗和相关的研究提供实验依据。

 
 
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