富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)/CCN1在早产儿视网膜病变(ROP)的视网膜新生血管(RNV)形成中发挥重要作用，但目前国内外关于CCN1小干扰RNA(CCN1 siRNA)对ROP有无延缓和治疗作用的研究较少。
探讨特异性抑制CCN1的表达对视网膜血管内皮细胞的调控作用。
恒河猴脉络膜－视网膜内皮细胞株(RF/6A)分别于常氧(正常对照组)和低氧环境(体积分数1%O2、5%CO2和94%N2的混合气体)中培养，低氧环境培养的细胞分别采用脂质体Lipofectamine™2000介导转染空载体质粒(低氧对照组)和CCN1 siRNA表达质粒(CCN1 siRNA转染组)，于细胞转染后24 h采用逆转录PCR法检测细胞中CCN1 siRNA重组质粒的表达情况；分别于培养后0、24、48、72和96 h采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定各组细胞活性并绘制细胞生长曲线；于培养后24 h采用流式细胞术检测各组培养细胞的增生和凋亡情况；于培养后24 h采用免疫荧光技术和Western blot法检测各组RF/6A细胞中CCN1和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达。
细胞转染后24 h用逆转录法检测到细胞中CCN1 siRNA的表达条带。CCK-8检测显示随着培养时间的延长，RF/6A细胞增生值(吸光度，A值)均明显增加，但CCN1 siRNA转染组各时间点细胞增生值均明显低于正常对照组和低氧对照组，总体比较差异均有统计学意义(F组别＝198.45，P<0.05；F时间＝39.26，P<0.05)；CCN1 siRNA转染组、正常对照组和低氧对照组细胞的凋亡率分别为(68.9±1.1)%、(18.9±1.3)%和(39.6±1.8)%，其中CCN1 siRNA转染组细胞的凋亡率明显高于正常对照组和低氧对照组，差异均有统计学意义(t＝2.93、2.56，均P<0.05)；CCN1和VEGF蛋白在正常对照组细胞中呈弱表达，在低氧对照组细胞中表达均明显增强，CCN1 siRNA转染组细胞中CCN1和VEGF的相对表达量较低氧对照组均明显下降(均P<0.05)。
CCN1 siRNA转染后能抑制RF/6A细胞的增生并促进其凋亡，CCN1 siRNA可下调缺氧环境下RF/6A细胞中CCN1和VEGF蛋白的表达水平，可能是抑制RNV形成的主要机制。
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早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity，ROP)是视网膜血管异常增生引起的婴幼儿致盲眼病，其主要的病理基础在于视网膜新生血管(retinal neovascularization，RNV)的形成[1,2]。RNV血管通透性增加，伴随着血管内皮细胞的激活、细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的降解，血管内皮细胞增生和迁移并分泌血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor，PDGF)，最终形成新的管腔结构[3]。新生血管芽在新形成的细胞外基质和周细胞的支持作用下生长，并受多种血管生成因子的调控而逐渐形成血管网[4]。因此，视网膜血管内皮细胞(retinal endothelial cells，RECs)的生物学行为在RNV的形成过程中占主导地位。半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61，Cyr61)/CCN1是一种重要的基质细胞蛋白，参与调节细胞的增生、黏附、迁移、分化、凋亡以及ECM的生成，在胚胎发育、软骨生成、血管生成、肿瘤的发生和发展以及伤口修复中发挥作用[5,6,7,8,9,10,11,12]。同时，CCN1还可以通过调节血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、I型胶原、基质金属蛋白酶(metrix metalloproteinases，MMPs)及其抑制剂等的表达和活性间接地促进血管生成和基质重建[13,14]，但其相互作用的具体途径仍在研究中。本研究中观察抑制CCN1表达对低氧培养的RF/6A细胞株增生和凋亡的影响，为临床治疗ROP提供新的思路。
