实验研究
雌二醇通过增加端粒酶活性影响人LECs生长动力学的实验研究
中华实验眼科杂志, 2016,34(3) : 219-225. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.03.006
摘要
背景

人LECs表达端粒酶活性,其活性改变与白内障的形成相关。研究证实,雌激素能增加人子宫内膜癌及乳腺癌细胞的端粒酶活性,从而发挥促进增生、抗凋亡作用,但能否增加人LECs中的端粒酶活性从而影响其生物学功能,国内外鲜见报道。

目的

探讨β型雌二醇(β-E2)是否能增加人LECs端粒酶活性及其对人LECs增生和凋亡的影响。

方法

体外培养并传代人LECs细胞系,先用1×10-6 mol/L β-E2分别作用人LECs 0、6、12、24和48 h,采用RT-PCR法确定增加人LECs中端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达的最佳时间。将培养的人LECs细胞分为5个组,空白对照组细胞进行常规培养,溶剂对照组在培养液中添加体积分数0.1%乙醇,不同浓度β-E2组分别在培养液中添加1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol/L β-E2,继续培养细胞24 h,采用RT-PCR法检测各组人LECs中hHERT mRNA的相对表达量;采用端粒重复序列扩增(TRAP)-ELISA法检测端粒酶活性;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞的增生值;采用Hoechst33258荧光染色法分析人LECs的凋亡情况。

结果

1×10-6 mol/L β-E2浓度下能够增加人LECs中hTERT mRNA相对表达量的最佳作用时间为24 h。1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol/L β-E2组人LECs中hTERT mRNA的相对表达量分别为0.477±0.015、0.712±0.013和0.914±0.031,明显高于空白对照组的0.428±0.010及溶剂对照组的0.426±0.010,差异均有统计学意义(均P<0.05)。1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol/L β-E2组端粒酶活性值分别为0.711±0.015、0.941±0.010和1.249±0.047,明显高于空白对照组的0.535±0.013和溶剂对照组的0.543±0.013,差异均有统计学意义(均P=0.000)。1×10-8 mol/L β-E2组细胞的增生值(A值)明显高于1×10-7 mol/L β-E2组和1×10-6 mol/L β-E2组,差异均有统计学意义(均P=0.000),而1×10-7 mol/L β-E2组和1×10-6 mol/L β-E2组与空白对照组间细胞中的细胞增生值间差异均无统计学意义(P=0.718、0.856)。1×10-8、1×10-7和1×10-6 mol/L β-E2组的细胞凋亡率均低于空白对照组和溶剂对照组(均P=0.000);空白对照组与溶剂对照组间比较差异无统计学意义(P=0.777)。人LECs增生值与hTERT mRNA相对表达量及端粒酶活性值间无明显直线相关关系(r=-0.299,P=0.278;r=-0.157,P=0.576)。人LECs凋亡率与hTERT mRNA相对表达量及端粒酶活性值间均呈明显负相关(r=-0.975,P=0.000;r=-0.981,P=0.000)。

结论

β-E2能上调人LECs中的端粒酶活性,稍高浓度的β-E2可能通过增加人LECs的端粒酶活性而抑制细胞凋亡,但无促增生作用。

引用本文: 王杰, 康刚劲, 袁雪峰, 等.  雌二醇通过增加端粒酶活性影响人LECs生长动力学的实验研究 [J] . 中华实验眼科杂志, 2016, 34(3) : 219-225. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.03.006.
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端粒的缩短与大量代谢性、退化性及年龄相关性疾病密切相关[1]。端粒酶作为一种逆转录酶,以自身RNA为模板合成新的端粒DNA序列,添加到端粒末端,发挥调节细胞周期与衰老、增生与凋亡的作用[2]。雌激素增加端粒酶活性并发挥抗凋亡等作用的研究主要集中在人子宫内膜癌细胞[3]、乳腺癌细胞[4]等高表达端粒酶活性的细胞中,其对于人LECs的作用国内外均鲜见研究。研究表明,人LECs属于雌激素受体阳性细胞且自身少量表达端粒酶活性[5,6],由此推测雌激素能上调人LECs中端粒酶的活性,抑制人LECs的凋亡,从而控制及延缓年龄相关性白内障的发生和发展。

 
 
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