实验研究
p21WAF1/CIP1在兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变发生和发展中的抑制作用
中华实验眼科杂志, 2016,34(5) : 420-425. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.05.008
摘要
背景

p21是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂,能阻止细胞从G1期进入S期,抑制细胞增生,研究认为内源性p21表达的动态变化可能与细胞增生性病变有关。外伤性增生性玻璃体视网膜病变(PVR)是眼部增生性反应相关性疾病,了解PVR过程中p21表达的动态变化可能为PVR的靶向治疗提供依据。

目的

检测p21WAF1/CIP1在兔外伤性PVR中的动态变化,探讨其在外伤性PVR发病机制中的作用。

方法

选取青紫蓝兔54只,采用随机数字表法将实验兔随机分为正常对照组(6只)和造模后7、14、21和28 d组(每组12只),每只兔任意选取一眼作为实验眼。各模型组兔眼玻璃体腔注射人富含血小板血浆(PRP)0.4 ml,同时于鼻上方角巩膜缘后5 mm处行巩膜外冷冻约5 s,以建立外伤性PVR模型。各组兔眼行眼部B型超声检查以评估建模情况。分别于造模后7、14、21和28 d以过量麻醉法处死实验兔并制备实验眼视网膜组织切片,采用苏木精-伊红染色法检测兔眼视网膜的形态表现,分别采用免疫组织化学染色、Western blot及逆转录PCR(RT-PCR)法检测兔视网膜中p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA的相对表达。

结果

正常对照组兔眼眼前后节均正常,模型组兔造模后1~7 d兔眼玻璃体中增生条索逐渐变粗,可见视网膜皱褶,造模后14 d兔眼出现牵引性视网膜脱离,造模后28 d兔眼漏斗状视网膜脱离。视网膜病理组织学检查显示,造模后7 d兔眼视网膜表面有增生膜和炎性细胞聚集,造模后28 d可见视网膜呈花瓣形固定皱褶,视网膜结构紊乱。免疫组织化学染色显示,p21WAF1/CIP1蛋白在正常对照组兔眼视网膜神经节细胞层及内核层的细胞核内呈强阳性表达,造模后7、14、21和28 d表达强度减弱,以造模后14 d表达量最低。Western blot结果显示,正常对照组和造模后7、14、21和28 d组兔眼视网膜中p21WAF1/CIP1蛋白相对表达量分别为0.74±0.08、0.60±0.05、0.56±0.03、0.74±0.02和0.65±0.04,组间总体比较差异有统计学意义(F=20.55,P=0.00),造模后7 d和14 d的表达量均明显低于正常对照组和造模后21 d和28 d组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。RT-PCR结果显示,正常对照组和造模后7、14、21和28 d组兔眼视网膜中p21WAF1/CIP1mRNA的相对表达量分别为0.65±0.09、0.57±0.05、0.45±0.04、0.46±0.02和0.47±0.04,总体比较差异有统计学意义(F=18.06,P=0.00),造模后14、21和28 d P21WAF1/CIP1mRNA的相对表达量均明显低于正常对照组和造模后7 d组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。

结论

p21WAF1/CIP1在外伤性PVR兔眼视网膜中的动态表达变化与PVR的病程发展过程相吻合,p21可能参与外伤性PVR发生和发展的病理过程,p21WAF1/CIP1表达量的下降与细胞增生的动态变化过程一致,可能促进了PVR的进展。

引用本文: 袁志刚, 由彩云, 韩金栋, 等.  p21WAF1/CIP1在兔外伤性增生性玻璃体视网膜病变发生和发展中的抑制作用 [J] . 中华实验眼科杂志, 2016, 34(5) : 420-425. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.05.008.
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外伤引起的增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)是开放性眼外伤的严重并发症,是眼内损伤的过度修复过程,损伤修复时多种增生细胞在视网膜表面聚集,引起增生性玻璃体视网膜病变[1],可导致牵拉性视网膜脱离[2],最终致眼球萎缩[3,4]。目前,PVR的发病机制仍不十分清楚,研究抑制PVR的方法和途径对PVR的防治具有重要的临床意义。研究表明,p21WAF1/CIP1是一种细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂,可与细胞周期蛋白依赖性激酶、细胞周期蛋白和增生细胞核抗原组成复合体,阻止细胞从G1期进入S期,引起细胞周期停止,抑制细胞增生[5],但p21WAF1/CIP1在PVR的形成过程中是否能够发挥抑制细胞增生作用尚不清楚。本研究检测p21WAF1/CIP1蛋白在外伤性PVR模型兔视网膜组织中的表达,探讨p21WAF1/CIP1在外伤性PVR发生和发展中的作用。

 
 
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