缺血缺氧损伤是引起大部分视觉系统损害的主要原因，目前尚无有效药物从根本上缓解缺血缺氧带来的损害。研究发现，微小RNA(miR)-30b有助于减轻缺血缺氧导致的心肌损伤，但其对糖氧剥夺的视网膜神经节细胞(RGCs)生存是否有类似的保护作用鲜有文献报道。
研究重组腺相关病毒介导的miR-30b转染对糖氧剥夺RGCs的保护作用。
取出生后24 h的8只SD大鼠眼球，剥离出视网膜组织以进行RGCs的原代培养，将原代培养的细胞分为重组腺相关病毒(rAAV)-miR对照组、rAAV-miR-30b拟似物组、rAAV-miR-30b抑制物组和PBS组，分别在培养液中添加rAAV-miRNA、rAAV-miR-30b拟似物、rAAV-miR-30b抑制物或PBS培养细胞6 d，RGCs∶AAV为1∶10 000。各组细胞分别进行低氧培养箱(37 ℃，体积分数5%CO2、17%N2、3%O2)联合低糖(葡萄糖质量浓度为1.0 g/L)培养液进行培养以建立原代糖氧剥夺RGCs模型，并与正常培养(37 ℃、5%CO2)的细胞进行对照。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞活力，采用免疫荧光染色法检测各组细胞中神经元特异性标志物Tubulin Ⅲ的表达，并计算存活RGCs数目。采用Hoechst/PI染色法检测各组细胞的凋亡和坏死情况。
培养7 d的正常成熟RGCs可见1～3条完整的细长神经元突起及其分支。糖氧剥夺后随着时间延长，培养的RGCs逐渐减少和破坏，突起的主干结构破碎。rAAV-miR-30b拟似物组细胞相对活性分别为3.310±0.162，明显高于rAAV-miR-30b抑制物组和rAAV-miR对照组的0.949±0.141和0.900±0.181，差异均有统计学意义(t＝10.508、10.296，均P<0.001)。存活的RGCs可表达Tubulin Ⅲ，呈红色荧光。rAAV-miR-30b拟似物组Tubulin Ⅲ阳性细胞数量为(13.800±1.924)/视野，明显多于rAAV-miR-30b抑制物组的(0.600±0.548)/视野和rAAV-miR对照组的(0.800±1.304)/视野，差异均有统计学意义(t＝15.141、14.912，均P<0.001)。rAAV-miR-30b拟似物组、rAAV-miR对照组和PBS组细胞凋亡率和死亡率的总体比较差异均有统计学意义(F＝10.851，P＝0.002；F＝6.378，P＝0.013)，rAAV-miR-30b拟似物组细胞凋亡率和死亡率均明显低于rAAV-miR对照组和PBS组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
低氧培养箱联合低糖培养液建立稳定的原代RGCs糖氧剥夺模型；rAAV介导的miR-30b转染可抵抗糖氧剥夺对RGCs的损伤。
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眼外伤、青光眼等缺血缺氧性眼病可对视神经造成不可逆的损伤，目前认为氧剥夺损伤机制在其中发挥重要作用[1]，用糖皮质激素类、抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和非甾体类抗炎药物等进行治疗往往不能达到预期疗效[2,3]，因此寻找新疗法是该领域的研究方向之一。对离体培养的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells，RGCs)进行糖氧剥夺处理来模拟体内缺血缺氧损伤是最常用的方法，建立稳定的离体糖氧剥夺模型有利于治疗药物的筛选。近年的研究表明，微小RNA(microRNAs，miR)参与机体内稳态的调节，包括机体组织对缺氧的应答反应[4,5]。我们前期的研究发现，大鼠视神经钳夹伤后视网膜中miR-30b表达水平升高，提示miR-30b可能参与伤后RGCs缺血缺氧的应答。此外，将miR-30b转染至RGCs可促进细胞轴突生长[6]。还有研究表明，人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19可通过抑制miR-30b而增加过氧化氢酶的表达，从而抵抗氧化应激损伤[7]。由此我们推测miR-30b可能对糖氧剥夺导致的RGCs损伤发挥保护作用。本研究中拟利用体外培养的RGCs建立糖氧剥夺模型，观察miR-30b对RGCs糖氧剥夺损伤的保护作用。
