晶状体上皮细胞(LECs)的细胞外基质(ECM)的产生、异常沉积和收缩是PCO发生的重要病理机制。Wnt3a蛋白参与机体组织上皮细胞ECM的产生和纤维化过程，但Wnt3a对晶状体组织中上皮间质转化(EMT)相伴行的ECM的产生和收缩的影响尚不清楚。
研究Wnt3a对体外培养的人LECs ECM合成的影响，并探讨其介导胶原凝胶收缩的相关分子机制。
用脂质体介导转染技术将Wnt3a cDNA表达载体瞬时转染人LECs系SRA01/04细胞作为Wnt3a转染组，对照组转染pcDNA3-HA表达载体。细胞转染后48 h，采用Western blot法测定各组细胞中Wnt3a、ECM主要成分Ⅰ型胶原纤维(Col-Ⅰ)，Ⅳ型胶原纤维(Col-Ⅳ)和整合素β1(integrin β1)的表达；采用免疫荧光法检测α-SMA、细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)在胞中的表达和分布。将SRA01/04细胞与Ⅰ型胶原凝胶混合，观察胶原收缩情况。
Wnt3a转染48 h，SRA01/04细胞内Wnt3a蛋白相对表达量(相对灰度值)明显升高，对照组细胞和Wnt3a转染组细胞中Wnt3a蛋白表达量分别为0.290±0.066和0.703±0.105，差异有统计学意义(t＝5.782，P<0.01)。Western blot法检测显示，Wnt3a转染组SRA01/04细胞中的Col-Ⅰ和integrin β1蛋白的相对表达量分别为0.697±0.021和0.875±0.055，明显高于对照组的0.370±0.020和0.580±0.030，差异均有统计学意义(t＝19.600、8.156，均P<0.01)，Wnt3a转染组Col-Ⅳ蛋白相对表达量为0.430±0.020，高于对照组的0.383±0.031，但差异无统计学意义(t＝2.514，P>0.05)。免疫荧光检测显示，对照组细胞中F-actin和α-SMA蛋白主要表达于细胞膜，而Wnt3a转染组细胞中F-actin和α-SMA蛋白表达于细胞膜、细胞质和细胞核周围，阳性染色程度较对照组明显增强。Col-Ⅰ凝胶收缩试验结果显示，细胞与Col-Ⅰ胶原凝胶混合后24 h凝胶收缩面积比率明显低于混合后8 h(64.1%±2.3%与98.9%±1.0%)，Wnt3a转染组凝胶收缩面积比率明显低于对照组(64.1%±2.3%与93.9%±3.1%)，差异均有统计学意义(均P<0.01)。
Wnt3a过表达可诱导SRA01/04细胞ECM合成和细胞骨架重建，促进细胞收缩。
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后囊膜混浊(posterior capaular opacification，PCO)是白内障囊外摘除术后最常见的并发症，其发生与晶状体囊膜的纤维化和囊袋内基质的积聚和收缩有关。其中细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的异常沉积是PCO发生的重要病理机制。Wnts蛋白参与肺及子宫内膜组织上皮细胞ECM的产生和纤维化过程[1,2]。我们先前的研究也发现Wnt3a介导的Wnt/β-catenin信号通路诱导LECs发生上皮间质转化(pithelial-mesenchymal transition，EMT)[3]，但Wnt3a对晶状体组织中EMT相伴行的ECM的产生和收缩的影响尚不清楚。本研究中通过瞬时转染Wnt3a过表达载体使人LECs SRA01/04过表达Wnt3a，检测Wnt3a对ECM蛋白的表达和细胞骨架蛋白在细胞中的表达和分布及其对ECM收缩的影响，明确Wnt3a促进LECs分泌ECM及细胞骨架重构的作用并探讨相关分子机制。
