实验研究
视神经损伤后脑衰反应调节蛋白-2表达及其磷酸化修饰的变化及意义
中华实验眼科杂志, 2016,34(10) : 874-877. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.10.002
摘要
背景

脑衰反应调节蛋白-2(CRMP-2)具有促进中枢神经轴突生长的作用,但中枢神经损伤后在细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)诱导下CRMP-2会发生过度磷酸化修饰,从而导致生长锥塌陷,阻碍神经系统的修复。视神经作为一种特殊的中枢神经组织,其损伤后是否发生CRMP-2表达的变化和磷酸化修饰鲜见研究报道。

目的

探讨视神经钳夹伤小鼠模型视神经组织中CRMP-2表达及其磷酸化修饰水平的动态变化及意义。

方法

选取8~9周龄健康BALB/c小鼠48只,雌雄不限。采用随机数字表法将小鼠随机分为假手术组和损伤后3、7、14 d组,每组12只。各损伤组小鼠右眼术中暴露视神经,用小号动脉夹于球后2 mm处夹持视神经10 s,假手术组小鼠手术操作同各损伤组,但不钳夹视神经。分别于术后3、7、14 d获取小鼠视神经组织,采用实时荧光定量PCR法检测各组小鼠视神经组织中CRMP-2 mRNA的相对表达量;采用Western blot法检测各组小鼠视神经组织中CRMP-2蛋白、磷酸化CRMP-2(p-CRMP-2)及CDK5的表达变化,检测结果进行组间比较。

结果

假手术组及损伤后3、7、14 d组小鼠视神经组织中CRMP-2 mRNA及蛋白相对表达量的总体比较差异均无统计学意义(CRMP-2 mRNA:F=2.971,P=0.097;CRMP-2蛋白:F=1.202,P=0.370)。假手术组及损伤后3、7、14 d组小鼠视神经组织中p-CRMP-2蛋白的相对表达量分别为0.001±0.000、0.064±0.003、0.136±0.005和0.346±0.012,CDK5蛋白的相对表达量分别为0.440±0.009、0.723±0.011、0.874±0.015和0.952±0.019,总体比较差异均有统计学意义(p-CRMP-2:F=445.600,P<0.001;CDK5:F=186.600,P<0.001),其中损伤后3、7、14 d组小鼠视神经组织中p-CRMP-2和CDK5蛋白的相对表达量均明显高于假手术组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。

结论

小鼠视神经钳夹伤后视神经组织中CRMP-2的表达无明显变化,但视神经组织中CDK5和p-CRMP-2蛋白表达均明显上调,且随着损伤后时间的延长上调更为明显。

引用本文: 陈小璠, 袁容娣, 叶剑, 等.  视神经损伤后脑衰反应调节蛋白-2表达及其磷酸化修饰的变化及意义 [J] . 中华实验眼科杂志, 2016, 34(10) : 874-877. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.10.002.
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眼外伤和青光眼等疾病易引起视神经的损伤,导致不可逆转的视功能损害。视神经损伤后神经细胞轴突的修复和再生是眼科相关领域的研究热点。既往研究表明,脑衰反应调节蛋白-2(collapsin response mediator protein-2,CRMP-2)能够促进中枢神经元轴突生长的执行单位——生长锥的延伸[1,2,3]。研究表明,脑组织损伤后,细胞周期素依赖蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase-5,CDK5)诱导CRMP-2发生过度磷酸化,导致生长锥塌陷,这可能是中枢神经系统损伤后难以再生和修复的主要病理机制[4,5]。视神经属于中枢神经组织,其损伤过程和机制是否与脑组织损伤相似尚不清楚。我们前期的研究发现,体外培养的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)中CRMP-2过表达能明显促进RGCs突起的生长,而小干扰RNA抑制CRMP-2表达后则抑制RGCs突起生长,提示CRMP-2可能在视神经的生长和损伤修复中发挥重要作用,但视神经损伤后是否会发生CRMP-2的表达变化及CRMP-2磷酸化修饰的改变目前鲜见报道。本研究中以视神经钳夹损伤模型鼠为研究对象,检测视神经损伤后组织中CRMP-2及磷酸化CRMP-2(phosphorylated CRMP-2,p-CRMP-2)的表达变化。

 
 
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