实验研究
加减驻景方含药血清对缺氧状态下大鼠脉络膜血管内皮细胞增生的抑制作用
中华实验眼科杂志, 2016,34(12) : 1065-1071. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.12.003
摘要
背景

黄斑区脉络膜新生血管(CNV)是致盲率较高的眼病之一,以往的主要治疗方法是光动力学疗法和玻璃体腔抗血管内皮生长因子(VEGF)药物注射,但均存在一定的不良反应。研究认为,加减驻景方的应用对相关病变有治疗效果。

目的

探讨加减驻景方含药血清对缺氧状态下大鼠脉络膜血管内皮细胞(RCVECs)增生的影响。

方法

10只SD大鼠给予0.525 g/ml加减驻景方药液20 ml/kg灌胃3 d,于末次给药后2 h无菌条件下采集腹主动脉血,制备加减驻景方含药血清。将培养的RCVECs分为4个组,空白对照组细胞用常规培养液进行培养,氯化钴组在培养液中添加100 μmol/L氯化钴100 μl以制备细胞缺氧模型,空白血清+氯化钴组在缺氧细胞培养液中添加体积分数20%空白血清,含药血清+氯化钴组在缺氧细胞培养液中添加体积分数20%含药血清。细胞培养后24 h采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞的增生情况;采用逆转录PCR和Western blot技术检测各组细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因和蛋白的相对表达量。

结果

培养的RCVECs生长良好,呈梭形。100 μmol/L氯化钴作用后成功建立了缺氧细胞模型。MTT法检测显示,空白对照组、氯化钴组、含药血清+氯化钴组和空白血清+氯化钴组吸光度(A)值分别为0.659±0.051、0.757±0.553、0.683±0.037和0.731±0.038,其中氯化钴组A值明显高于空白对照组和含药血清+氯化钴组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。空白对照组、氯化钴组、含药血清+氯化钴组和空白血清+氯化钴组细胞中HIF-1α mRNA和VEGF mRNA及其蛋白的相对表达量总体比较,差异均有统计学意义(HIF-1α mRNA:F=3.100,P<0.05;VEGF mRNA:F=3.420,P<0.05;HIF-1α蛋白:F=470.600,P=0.000;VEGF蛋白:F=146.700,P=0.000),其中氯化钴组细胞中HIF-1α mRNA、VEGF mRNA及其蛋白的相对表达量均明显高于空白对照组和含药血清+氯化钴组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。

结论

加减驻景方含药血清可能通过抑制RCVECs分泌HIF-1α和VEGF的机制而抑制缺氧状态下RCVECs的增生。

引用本文: 刘彦江, 亢泽峰, 邢凯, 等.  加减驻景方含药血清对缺氧状态下大鼠脉络膜血管内皮细胞增生的抑制作用 [J] . 中华实验眼科杂志,2016,34 (12): 1065-1071. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.12.003
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脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)是病理性近视严重的并发症,也是患者致盲和低视力的主要原因之一。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)可促进血管内皮细胞的活化、增生和迁移,在CNV的形成中发挥重要作用,研究表明在病理性近视形成的过程中因缺氧微环境所产生的缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)可促进VEGF高表达,参与CNV的形成[1]。临床研究证实,加减驻景方既能补肝肾益精血和补脾气除痰湿,又可行气活血而通络,从而抑制CNV的形成[2],但其机制尚不清楚。本研究观察加减驻景方含药血清对体外培养缺氧诱导的大鼠脉络膜血管内皮细胞(rat choroidal vascular endothelial cells,RCVECs)中HIF-1α和VEGF的影响,为中医药治疗病理性近视所致的CNV提供新的思路。

 
 
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