实验研究
视网膜变性小鼠视网膜组织中FasL蛋白表达的动态变化
中华实验眼科杂志, 2017,35(1) : 17-21. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2017.01.004
摘要
背景

视网膜移植是治疗视网膜变性性疾病的新方法,但如何避免或减少视网膜移植后的免疫排斥反应是亟待解决的问题之一。目前的实验研究中常将正常C57BL/6小鼠视网膜作为供体,视网膜变性(rd)小鼠作为受体。研究表明视网膜中Fas配体(FasL)蛋白通过FasL/Fas途径诱导Fas炎症细胞凋亡,推测可能与视网膜移植后的免疫排斥反应密切相关。

目的

探讨FasL蛋白在不同鼠龄C57BL/6小鼠和rd小鼠视网膜中的表达特点,揭示小鼠视网膜的免疫特性,为视网膜移植免疫排斥反应的研究提供参考依据。

方法

分别将出生后(PN)-0周(出生日)、PN-1周、PN-2周、PN-3周、PN-4周的正常C57BL/6小鼠和rd小鼠处死制备眼球冰冻切片,采用免疫荧光技术摄片,并经激光扫描共焦显微镜采集图片,用图像分析软件对各鼠龄不同品系小鼠间视网膜中FasL蛋白表达的荧光强度(FI)变化进行半定量分析。

结果

PN-1周C57BL/6小鼠视网膜发育尚不完善,FasL蛋白在视网膜各层均呈阳性表达。PN-2、3、4周C57BL/6小鼠已发育成10层的视网膜结构,FasL蛋白在视网膜色素上皮(RPE)、内节段(IS)、外界膜(OLM)、外丛状层(OPL)、内核层(INL)、内丛状层(IPL)及节细胞层(GCL)呈阳性表达。PN-1周rd小鼠视网膜结构与同龄C57BL/6小鼠接近,FasL蛋白在视网膜各层均呈阳性表达。PN-2周至PN-4周rd小鼠视网膜中外核层(ONL)细胞随着鼠龄增大逐渐减少,FasL蛋白在RPE、OPL、INL、IPL及GCL呈阳性表达;PN-2、3、4周rd小鼠RPE中FasL蛋白表达FI值分别为184.199±16.747、186.797±7.904和184.319±18.795,均明显高于同龄C57BL/6小鼠的160.402±22.851、160.995±22.799和105.787±17.676,差异均有统计学意义(t=-3.360,P=0.002;t'=-4.277,P=0.000;t=-12.175,P=0.000);各周龄rd小鼠与C57BL/6小鼠间视网膜IPL中FasL蛋白表达的FI值差异均无统计学意义(均P>0.05)。

结论

rd小鼠随着鼠龄增加视网膜ONL细胞逐渐减少,其RPE内免疫赦免相关抗原FasL蛋白的表达强度明显高于同龄C57BL/6小鼠。

引用本文: 田洁, 李根林. 视网膜变性小鼠视网膜组织中FasL蛋白表达的动态变化 [J] . 中华实验眼科杂志, 2017, 35(1) : 17-21. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2017.01.004.
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视网膜移植是近年来研究治疗视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)和年龄相关性黄斑变性等不可逆性视觉损害性眼底病的新方法之一。视网膜移植采用健康视网膜细胞替代病变视网膜细胞,并使移植的视网膜细胞与受体组织建立功能联系,从而改善患者的视功能[1]。目前供体视网膜移植细胞的研究多集中在诱导多能干细胞、间充质干细胞、神经干细胞分化的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium(RPE)细胞、人胚胎干细胞分化的RPE细胞等方面,各项研究均取得了一定的进展[2,3,4],移植部位和方式多选择为视网膜下腔注射。与其他移植受体组织不同的是,RPE细胞具有免疫赦免特性,其对移植物不发生排斥反应,因此在合适的条件和微环境下移植的细胞可以长期存活[5]。研究认为这可能与其能够表达Fas配体(Fas ligand,FasL)蛋白,并可通过FasL/Fas途径诱导Fas的炎症细胞凋亡密切相关[6]。尽管如此,移植后的整合细胞数仍大量减少,研究证实移植部位有大量的巨噬细胞和T细胞,提示视网膜细胞移植后局部发生了慢性免疫反应[7]。因此视网膜移植研究中如何避免或抑制免疫排斥反应是目前亟待解决的问题之一,了解供体和受体组织与免疫排斥反应相关的各种因素的相互作用是研究的关键。一般来说,在关于视网膜移植的动物实验中多以正常C57BL/6小鼠作为供体,视网膜变性(retinal degeneration,rd)小鼠作为受体,但2种小鼠视网膜中FasL蛋白的表达及作用尚不清楚。本研究中拟比较和研究C57BL/6小鼠和rd小鼠视网膜组织中FasL蛋白随着小鼠生长的动态表达变化,揭示正常和病理条件下视网膜的免疫特性,为进一步视网膜移植免疫排斥反应及相关免疫性眼病的研究提供实验依据。

 
 
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