色素性青光眼和假性剥脱性青光眼均以色素颗粒沉积于房角为主要特征，虹膜色素颗粒的沉积除阻塞房角的房水引流通道外，对小梁网的吞噬功能也可造成不可逆性损害，从而导致细胞外基质重塑异常。青光眼患者房水和小梁网组织中转化生长因子-β(TGF-β)含量升高，尤以假性剥脱性青光眼患者更为明显，但TGF-β和纤维连接蛋白(FN)在虹膜色素颗粒培养的小梁细胞中的表达变化尚不清楚。
探讨虹膜色素颗粒培养的牛小梁细胞中TGF-β1和FN的表达变化，为青光眼的发病机制研究提供实验依据。
采用组织块培养法培养新鲜牛眼小梁细胞，根据细胞的形态对培养细胞进行鉴定。将第3代牛小梁细胞接种于6孔培养板并分为正常对照组和虹膜色素颗粒干预组，分别在培养基中加入100 μl色素颗粒工作液(终浓度为1×107/ml)和100 μl 0.01 mol/L PBS，继续培养24 h。采用荧光定量PCR法检测各组细胞内TGF-β1 mRNA和FN mRNA的相对表达量；采用竞争ELISA法检测各组细胞培养上清液中TGF-β1和FN蛋白的质量浓度。
体外培养的细胞呈长梭形、多角形或树枝状，细胞中可见色素，细胞核圆且居中，符合牛小梁细胞的形态特征。荧光定量PCR法检测显示，虹膜色素颗粒干预组细胞中TGF-β1 mRNA相对表达量为2.98±0.27，明显高于正常对照组的1.00±0.00，FN mRNA相对表达量为0.36±0.10，明显低于正常对照组的1.000±0.000，差异均有统计学意义(t＝12.68，P＝0.00；t＝10.60，P＝0.00)。ELISA法检测显示，虹膜色素颗粒干预组细胞培养上清液中TGF-β1蛋白质量浓度为(156.60±9.74)ng/L，明显高于正常对照组的(65.46±14.24)ng/L，FN蛋白质量浓度为(59.29±15.79)mg/ml，低于正常对照组的(102.10±12.14)mg/ml，差异均有统计学意义(t＝9.15，P＝0.00；t＝3.72，P＝0.02)。
虹膜色素颗粒培养的牛小梁细胞中TGF-β1表达上调而FN表达下调，推测TGF-β1和FN参与色素性和假性剥脱性青光眼的发病和进展过程。
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色素性青光眼和假性剥脱性青光眼均以色素颗粒沉积于房角为主要特征，色素颗粒沉积对小梁网的影响除阻塞房水引流通道外，也对其周围细胞造成不可逆性损害[1]。生理状态下，小梁细胞能吞噬色素颗粒和细胞碎片，并分泌多种酶类和细胞因子，在保持小梁网的渗透性、维持房水的平衡中发挥重要作用[2]，但颗粒物质的过量堆积则会导致小梁细胞功能(包括吞噬功能和分泌功能等)受损，使小梁网周围的细胞因子稳态失衡，小梁网滤过功能造成不可逆性损害，进而引起房水外流阻力增加，最终导致病理性眼压升高[3]，其分子机制尚未完全阐明。研究表明，转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)可能是参与青光眼发生和发展并最终引起高眼压的关键细胞因子[4,5,6]。研究发现青光眼患者房水和小梁网组织中TGF-β1和TGF-β2含量明显高于正常人，并且假性剥脱性青光眼患者小梁网组织中TGF-β1含量的升高尤为明显[7]。TGF-β1作为一种具有多种生物学效应的细胞因子，其过度表达促进胶原蛋白、弹性蛋白、纤维连接蛋白和肌丝蛋白的合成，引起组织的纤维化。然而，TGF-β/Smads信号通路通过上调核因子-κB(nuclear facor-κB，NF-κB)抑制分子(nuclear factor kappa B inhibitor，IκBα)的转录水平来抑制NF-κB的活化，从而发挥抑制炎症的作用较少关注[8]。本研究拟观察虹膜色素颗粒沉积状态下小梁细胞中TGF-β1和纤维连接蛋白(fibronectin，FN)的表达情况，并分析虹膜色素对小梁细胞中TGF-β1的表达变化，为进一步研究虹膜色素对小梁网组织的损害作用及其机制提供新的思路。
