实验研究
临床常用药物对体外培养的复发性翼状胬肉成纤维细胞的抑制效果比较
中华实验眼科杂志, 2017,35(6) : 512-519. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2017.06.006
摘要
背景

翼状胬肉是眼科常见的眼表疾病,临床上常用的防治翼状胬肉复发的药物包括地塞米松(DXM)、干扰素α-2b(IFN-α2b)、丝裂霉素C(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、环孢素A(CsA)和他克莫司(FK506),但鲜见关于这6种药物对复发性翼状胬肉成纤维细胞生物学行为抑制作用的比较研究。

目的

观察DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CSA和FK506对体外培养的人复发性翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用,筛选治疗复发性翼状胬肉的最佳药物。

方法

收集2015年5月至2016年7月在天津医科大学眼科医院行复发性翼状胬肉切除术的患者术中切除的组织标本7例7眼,采用组织块培养法分离和培养成纤维细胞,采用免疫组织化学法对培养细胞进行鉴定。分别在培养液中添加DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CsA和FK506作用48 h,未添加药物的培养细胞作为对照组。采用CCK-8法检测各种药物对培养细胞的生长抑制率,分别计算药物的半数抑制浓度(IC50)。在药物IC50剂量下作用48 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡比例和细胞周期的变化;采用免疫组织化学法检测细胞中增生细胞核抗原(PCNA)的表达变化。

结果

培养的细胞为长梭形,呈旋涡状排列,细胞中波形蛋白表达阳性,角蛋白无表达。DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CsA和FK506对成纤维细胞的IC50分别为(3.5×103±2.83×10-2)、(6.1×102±3.6×10-3)、(3.2×10-1±1×10-4)、(2.2×101±1.2×10-3)、(6.3×101±2.5×10-3)和(6.0×101±0.0×100)mg/L。在IC50剂量下分别作用后48 h,IFN-α2b组、CsA组、MMC组、FK506组、DXM组和5-FU组凋亡细胞比例分别为(35.00±3.21)%、(30.37±1.67)%、(26.11±0.75)%、(22.01±0.07)%、(20.95±1.68)%和(19.85±0.52)%,与对照组的(11.38±2.18)%比较细胞凋亡比例均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组G0/G1期、S期和G2/M期细胞比例分别为(85.64±2.62)%、(5.29±1.56)%和(2.73±2.66)%,各药物组G0/G1期细胞比例明显下降,S期和G2/M期细胞明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05),对细胞周期阻滞效果由强到弱依次为MMC、CsA、5-FU、DXM、IFN-α2b和FK506。对照组细胞中可见有大量PCNA阳性表达,各药物组细胞中PCNA表达强度均弱于对照组。对照组、FK506组、DXM组、5-FU组、IFN-α2b组、CsA组和MMC组细胞中PCNA的阳性表达率分别为(95.00±2.00)%、(82.67±5.04)%、(80.00±2.78)%、(64.00±6.55)%、(38.00±3.00)%、(32.00±4.36)%和(29.67±3.02)%,总体比较差异有统计学意义(F=25.995,P=0.000),各药物组细胞中PCNA阳性表达率均明显低于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。

结论

DXM、IFN-α2b、MMC、5-FU、CsA和FK506均可抑制复发性翼状胬肉成纤维细胞的增生并促进细胞凋亡,其中MMC和CsA的作用更为显著。

引用本文: 孙亚杰, 林婷婷, 何彦津, 等.  临床常用药物对体外培养的复发性翼状胬肉成纤维细胞的抑制效果比较 [J] . 中华实验眼科杂志, 2017, 35(6) : 512-519. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2017.06.006.
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翼状胬肉是眼科常见的眼表疾病,其手术治疗的方法包括翼状胬肉切除术联合准分子激光抛光术、翼状胬肉切除术联合自体结膜移植术、准分子激光术、翼状胬肉切除术联合自体角膜干细胞移植术,但均存在一定的复发率[1,2],且复发后二次手术的难度加大,患者接受能力差。临床上常用的预防和治疗翼状胬肉术后复发的局部应用的药物主要有抗细胞增生药物、免疫抑制剂和糖皮质激素类药物,但是各种药物对翼状胬肉的疗效仍缺乏足够的评价依据。本研究拟对临床常用药物对人翼状胬肉成纤维细胞的抑制能力进行对比,为临床上翼状胬肉的用药选择提供参考依据。

 
 
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