实验研究
石斛多糖对糖尿病大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制
中华实验眼科杂志, 2017,35(07) : 611-616. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2017.07.008
摘要
背景

糖尿病视网膜病变(DR)的发病机制涉及多条通路,近年来炎症因子相关的通路学说在DR发病中的作用越来越受到人们的关注。研究表明,高糖环境下视网膜内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等促炎因子含量增加,从而加速视网膜中紧密连接蛋白的异常,导致血-视网膜屏障(BRB)破坏。研究发现石斛多糖可抑制TNF-α的高表达,但其在DR早期对TNF-α表达的影响尚不清楚。

目的

研究石斛多糖对糖尿病大鼠TNF-α诱导的BRB通透性异常及视网膜内紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、连接蛋白-5(claudin-5)表达的影响。

方法

将50只清洁级成年SD大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高剂量石斛多糖组,每组10只大鼠,糖尿病模型组和低、中、高剂量石斛多糖组大鼠均采用链脲佐菌素腹腔内注射法诱导糖尿病模型。低、中、高剂量石斛多糖组于建模成功后6周按照分组分别用100、200及300 mg/(kg·d)石斛多糖灌胃,正常对照组和糖尿病模型组大鼠用生理盐水灌胃。干预后8周各组大鼠心脏灌注伊文思蓝并获取双侧眼球,分别进行相关指标检测,通过测定大鼠视网膜中伊文思蓝质量浓度评估大鼠视网膜渗漏量;采用Western blot法检测大鼠视网膜内ZO-1、occludin、claudin-5蛋白的相对表达量,采用ELISA法检测大鼠视网膜中及血清中TNF-α的质量浓度。

结果

正常对照组、糖尿病模型组及低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量分别为(12.68±1.30)、(30.45±2.60)、(22.12±1.15)、(17.99±1.00)和(21.49±1.00)μg/μl,糖尿病模型组大鼠视网膜伊文思蓝渗漏量明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组视网膜伊文思蓝渗漏量明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。Western blot检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜中TNF-α蛋白相对表达量为1.12±0.10,明显高于正常对照组的0.27±0.03,低、中、高石斛多糖组视网膜中TNF-α蛋白表达量明显低于糖尿病模型组,ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达量明显高于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05);ELISA法检测显示,糖尿病模型组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显高于正常对照组,低、中、高石斛多糖组大鼠视网膜和血清中TNF-α质量浓度明显低于糖尿病模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。不同剂量石斛多糖组各指标的比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。

结论

石斛多糖可能通过下调糖尿病大鼠视网膜中TNF-α的表达和上调紧密连接蛋白的表达而改善糖尿病大鼠BRB通透性的异常。

引用本文: 李静文, 李国文, 陆骏, 等.  石斛多糖对糖尿病大鼠血-视网膜屏障的保护作用及其机制 [J] . 中华实验眼科杂志,2017,35 (07): 611-616. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2017.07.008
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研究证实,糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是一种慢性亚临床型炎症性疾病[1],早期改变以白细胞黏附、聚集及移行,血管通透性增加,血-视网膜屏障(blood-retina barrier,BRB)破坏为主要病理特征。BRB损伤是早期DR的重要病理基础[2],也是DR炎症性疾病的主要表现之一[3]。BRB正常组织结构和功能的维持与内皮细胞之间的紧密连接关系密切。参与形成紧密连接复合体的蛋白质包括连接蛋白-5(claudin-5)、闭合蛋白(occludin)多种跨膜蛋白及闭锁小带1(zonula occludens-1,ZO-1)蛋白等膜相关蛋白类[4,5]。高糖环境下视网膜内促炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)含量增加,可作用于视网膜的微血管,诱导细胞间黏附分子-1表达增加,促进白细胞黏附于血管内皮细胞,甚至阻塞血管,导致毛细血管无灌注,破坏BRB[6,7]。研究发现,高糖环境下TNF-α的高表达与紧密连接的破坏有密切关系,抑制TNF-α表达可增加视网膜内claudin-5、occludin、ZO-1的表达,减轻DR眼BRB的损伤[8,9]。铁皮石斛是传统的中草药,其资源可再生、药理活性及低毒特性逐渐引起人们的关注。多糖是铁皮石斛中主要的药用活性成分之一,研究发现,石斛多糖在高糖环境下可抑制TNF-α的高表达[10],但石斛多糖是否可通过抑制TNF-α在DR视网膜中的表达而对BRB发挥保护作用尚不清楚。本研究主要探讨石斛多糖是否能降低糖尿病模型鼠视网膜内TNF-α的水平,研究石斛多糖对DR视网膜BRB通透性的影响。

 
 
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