探讨Src激酶抑制剂CGP77675(CGP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人视网膜色素上皮(RPE)细胞上皮－间质转化(EMT)过程的作用及其机制。
将培养的人RPE细胞株(ARPE19)分为对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1＋CGP处理组，并根据分组用相应药物处理细胞。细胞体外培养后3 d于光学显微镜下观察各组细胞的形态变化；分别采用实时荧光定量PCR法、Western blot法和免疫荧光染色法检测各组细胞中EMT相关基因及其蛋白的表达变化，包括细胞中纤溶酶原激活物抑制蛋白-1(PAI1)和纤连蛋白-1(FN1)的相对表达量及上皮细胞中闭锁小带蛋白1(ZO1)和细胞骨架蛋白F-肌动蛋白(F-actin)的分布；采用MTT法检测各组细胞的增生率；采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力。
对照组ARPE19细胞呈上皮样形态，F-actin和ZO1沿细胞膜表达；TGF-β1处理组细胞为纤维样，F-actin表达的排列紊乱，细胞膜上ZO1表达不连续。TGF-β1＋CGP处理组细胞维持上皮样形态，F-actin和ZO1表达清晰且完整。对照组、TGF-β1处理组和TGF-β1＋CGP处理组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F＝33.14、82.92，均P<0.01)，对照组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量为0.211±0.080和0.116±0.073，TGF-β1＋CGP处理组细胞中FN1 mRNA和PAI1 mRNA相对表达量分别为0.368±0.097和0.362±0.048，均明显低于TGF-β1处理组的1.000±0.001和1.000±0.001，差异均有统计学意义(均P<0.05)。3个组细胞中FN1和PAI1蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F＝181.90、48.85，均P<0.01)，对照组细胞中FN1和PAI1蛋白相对表达量分别为0.166±0.055和0.327±0.066，TGF-β1＋CGP处理组FN1和PAI1蛋白相对表达量分别为0.143±0.030和0.260±0.077，均明显低于TGF-β1处理组的1.000±0.001和1.000±0.001，差异均有统计学意义(均P<0.05)。细胞处理后3 d，TGF-β1＋CGP处理组细胞增生率为(79.30±3.44)%，与对照组的(99.50±1.00)%和TGF-β1处理组的(95.10±4.20)%比较均明显下降，差异均有统计学意义(均P<0.01)；处理后7 d，TGF-β1＋CGP处理组细胞增生率为(54.80±7.39)%，明显低于TGF-β1处理组的(92.10±4.50)%和对照组的(99.10±0.50)%，差异均有统计学意义(均P＝0.004)。细胞划痕试验显示，TGF-β1处理组细胞迁移能力明显增强，TGF-β1＋CGP处理组划痕宽度无明显变化。
Src激酶抑制剂CGP能够抑制由TGF-β1诱导的ARPE19细胞EMT，提示Src信号通路与EMT过程有关。
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视网膜色素上皮(retina pigment epithelium，RPE)细胞是位于神经视网膜和脉络膜之间的单层细胞，对于神经视网膜，特别是光感受器细胞的存活及其功能的维持具有重要作用[1]。生理条件下RPE细胞不发生分裂增生，但当神经视网膜受到损伤时，RPE细胞重新进入细胞分裂周期并发生上皮－间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)，这也是增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreous retinopathy，PVR)的病理特征之一[2,3]。研究证实EMT过程中有极性的上皮细胞与其周围细胞分离并从基底膜脱落，失去其上皮特性而呈现间质细胞形态，同时获得增生、迁移和产生大量细胞外基质成分的能力[4]，PVR病程中RPE细胞也发生类似改变而迁移到视网膜前膜和后膜，引起视网膜脱离[5,6,7]，因此抑制RPE细胞的增生和EMT的发生是治疗PVR的重要环节。转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)在多种纤维化疾病中发挥重要作用，在PVR的发生中，TGF-β1是一个关键的诱导信号分子，可诱导RPE细胞转分化为纤维样细胞[8,9,10]，可能与非经典的氧化还原依赖的Src蛋白的激活有关[11]。Src是细胞质中的一种非受体酪氨酸蛋白激酶，在许多肿瘤中被异常激活，在肿瘤转移和EMT过程中发挥重要作用[12,13]，PVR以及RPE细胞的EMT过程与肿瘤细胞相似，但Src在PVR以及RPE细胞的EMT过程中是否发挥相应作用尚不清楚。本研究探讨Src信号通路是否参与TGF-β1诱导的RPE细胞EMT过程及其可能的机制，为PVR的防治提供实验依据。
