探讨酪氨酸激酶抑制剂Genistein对高氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成中的抑制作用及其机制。
采用随机数字表法将36只7日龄清洁级C57BL/6J小鼠随机分为高氧诱导组、Genistein组、二甲亚砜(DMSO)组和正常对照组，每组9只。高氧诱导组、Genistein组、DMSO组小鼠与母鼠在氧体积分数为(75±2)%的密闭氧箱内喂养5 d，然后返回到正常室内环境中喂养5 d。高氧诱导组小鼠不给予药物处理，Genistein组和DMSO组小鼠于出生后12 d玻璃体腔内分别注射Genistein(溶于DMSO，400 mg/L)和DMSO各1 μl。正常对照组小鼠在正常室内环境中喂养。各组分别取2只17 d鼠龄小鼠，采用视网膜血管荧光造影后制备视网膜铺片，于荧光显微镜下观察小鼠双眼视网膜血管形态。另将各组各7只小鼠全部处死，获取双眼视网膜，采用实时荧光定量PCR法测定小鼠视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA的相对表达量(2－ΔΔCt)；采用Western blot法测定各组小鼠视网膜中VEGF和bFGF蛋白的相对表达量。
荧光显微镜下可见正常对照组小鼠视网膜主要血管和毛细血管形态正常，高氧诱导组和DMSO处理组小鼠血管迂曲，较多新生血管簇和视网膜缺血无灌注区，Genistein处理组小鼠视网膜血管清晰，可见无灌注区。正常对照组、高氧诱导组、DMSO组和Genistein组小鼠视网膜中VEGF mRNA相对表达量分别为0.04±0.02、0.64±0.25、0.37±0.23和0.03±0.02，bFGF mRNA相对表达量分别为0.67±0.23、21.40±3.07、17.22±2.63和0.52±0.25，与正常对照组和Genistein组比较，高氧诱导组和DMSO组小鼠视网膜中VEGF mRNA和bFGF mRNA的相对表达量均显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)，正常对照组与Genistein组间小鼠视网膜中VEGF mRNA和bFGF mRNA的相对表达量比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。正常对照组、高氧诱导组、DMSO组和Genistein组小鼠视网膜中VEGF蛋白的相对表达量分别为0.52±0.05、1.01±0.05、1.06±0.07和0.73±0.05，bFGF蛋白相对表达量分别为0.56±0.05、0.97±0.06、1.03±0.08和0.76±0.07，4个组小鼠视网膜中VEGF和bFGF蛋白相对表达量的总体比较差异均有统计学意义(F＝120.74、57.98，均P＝0.00)。与正常对照组和Genistein组比较，高氧诱导组和DMSO组小鼠视网膜中VEGF和bFGF蛋白相对表达量显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
Genistein能抑制高氧诱导的视网膜新生血管的形成，其机制可能是通过抑制组织中VEGF和bFGF的表达。
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视网膜新生血管性眼病是临床上重要的致盲眼病之一，包括增生性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy，PDR)、视网膜静脉阻塞(retinal vein obstruction，RVO)、早产儿视网膜病变(retinopathy of prematurity，ROP)等，其主要的病理改变是视网膜新生血管形成[1,2,3]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一种与多种眼部疾病发病机制有关的因子[4]，近年来，抗VEGF药物广泛应用于血管性眼部疾病的治疗，许多临床试验表明抗VEGF治疗的有效性[5,6,7]。虽然这些药物在减缓疾病的进程和提高视力方面显示出一定的效果，但需要多次进行眼内注射，有发生严重眼部不良反应的风险，如眼内炎、视网膜脱离、医源性白内障和外伤性白内障等[8,9]，同时也给患者带来了沉重的经济负担，因此寻找其他有效治疗视网膜新生血管药物非常必要。Genistein是一种特异性酪氨酸激酶抑制剂[10]，多种血管源性生长因子，如VEGF、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)、血小板源性生长因子(platelet derived growth factor，PDGF)等生长因子受体均具有酪氨酸激酶特性[11]，故推测Genistein可作用于这些生长因子的酪氨酸酶受体，抑制生长因子的表达，从而发挥抑制视网膜新生血管形成的作用。为了验证上述假设，本研究探讨Genistein对高氧诱导视网膜新生血管动物模型视网膜新生血管的抑制作用及其机制。
