探讨瞬时受体电位M7(TRPM7)在地塞米松诱导的小梁细胞骨架重塑中的作用。
采用人小梁细胞株进行体外培养，第3～6代小梁细胞用于实验。采用免疫荧光检测技术对TRPM7在小梁细胞中的表达进行定位。在细胞培养基中加入0.2 mg地塞米松处理小梁细胞4 d，终浓度分别为1×10－5、1×10－6和1×10－7 mol/L，采用Western blot法检测细胞中TRPM7蛋白在细胞中的表达量。将培养的小梁细胞分为正常对照组、siRNA转染组、TRPM7-siRNA1转染组和TRPM7-siRNA2转染组，采用Western blot法检测细胞中TRPM7和p-cofilin相对蛋白表达量。将培养的细胞分为正常对照组、TRPM7-siRNA转染组、地塞米松处理组和TRPM7-siRNA转染＋地塞米松组，采用免疫荧光技术法观察各组细胞中细胞骨架蛋白Phalloidin和黏着斑蛋白Vinculin的表达。将培养的细胞分为正常对照组、地塞米松处理组、siRNA转染组、TRPM7-siRNA转染组、TRPM7抑制剂2-APB处理组和钙离子螯合剂EGTA处理组，采用免疫荧光技术测定各组细胞内钙离子荧光强度变化。
TRPM7主要分布于小梁细胞的细胞膜，TRPM7蛋白相对表达量随着地塞米松剂量的增加而逐渐下降，组间总体比较差异有统计学意义(F＝4.210，P<0.05)，1×10－5 mol/L地塞米松组细胞中TRPM7蛋白表达量明显低于正常对照组，差异有统计学意义(P＝0.011)。与正常对照组和siRNA转染组比较，TRPM7-siRNA1组和TRPM7-siRNA2组细胞中TRPM7蛋白相对表达量均明显降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。倒置显微镜下可见地塞米松处理组和TRPM7-siRNA转染组细胞突起减少，细胞体稍变大。免疫荧光法显示地塞米松处理组小梁细胞骨架张力纤维和黏着斑蛋白增多，TRPM7-siRNA转染组细胞中张力纤维变少、变细。与正常对照组和siRNA转染组比较，地塞米松处理组和TRPM7-siRNA转染组细胞内钙离子荧光强度变弱。Western blot检测显示，TRPM7-siRNA转染组细胞中p-confilin蛋白相对表达量明显低于siRNA转染组(0.317±0.031 vs.0.092±0.071)，差异有统计学意义(t＝5.030，P＝0.007)。
高剂量地塞米松作用后可导致小梁细胞中TRPM7蛋白表达量下调，TRPM7蛋白下调可能通过使小梁细胞骨架微丝蛋白解聚和细胞内钙离子浓度的降低而参与地塞米松诱导的小梁细胞中细胞骨架的重塑。
版权归中华医学会所有。
未经授权，不得转载、摘编本刊文章，不得使用本刊的版式设计。
除非特别声明，本刊刊出的所有文章不代表中华医学会和本刊编委会的观点。
青光眼是由多因素引起的不可逆性致盲眼病。原发性开角型青光眼(primary open angle glaucoma，POAG)是一种常见的青光眼类型，持续眼压升高是其致盲的主要危险因素[1]。正常眼压的维持主要依靠小梁网和邻管组织对房水外流的调节作用，研究发现青光眼患者小梁细胞的数量和形态与正常人明显不同[2]。有文献报道，改变小梁细胞的形态、体积、收缩能力以及细胞外基质成分、含量和黏附作用均对小梁网途径的房水流出产生影响[3,4,5]，其中小梁细胞骨架的重塑是主要的影响因素[6]。研究发现结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)及其下游产物神经介素U(neuromedin U，NMU)影响小梁细胞的骨架结构，导致猪眼房水外流受阻[7]。然而，在疾病进程中小梁细胞骨架的变化涉及到的具体机制尚未完全阐明。目前由糖皮质激素导致的青光眼，尤其地塞米松致青光眼的发病机制仍不十分清楚，文献所述的地塞米松致青光眼的发病机制主要由于细胞外基质堆积并堵塞小梁细胞的房水滤过通道和引起的交联骨架，使得细胞不能应对房水压力变化，最终妨碍房水外流[8,9]。瞬时受体电位(transient receptor potential，TRP)通道是一类感受器，能对生物细胞感受广泛的物理和化学刺激发挥协调作用。哺乳类动物中根据TRP的同源性分为28个TRP通道，其中TRPM7在细胞骨架重塑中发挥重要作用[10,11,12,13]。目前关于TRPM7与组织的生理病理关系的研究主要聚焦于视网膜[14,15,16]，而TRPM7与眼小梁细胞的关系鲜见报道。研究表明，小梁细胞肌动蛋白纤维(微丝)的组装受外部钙、镁离子的影响，同时，微丝的聚合和解聚又受丝切蛋白磷酸化的调控。由于在其他细胞中TRPM7通道能通过钙、镁离子和C末端的磷酸激酶区调节细胞骨架结构，因此我们推测TRPM7在小梁细胞中有类似作用。本研究中拟构建地塞米松诱导的小梁细胞骨架重塑模型，通过小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)转染技术调控细胞中TRPM7的表达，探讨TRPM7在小梁细胞骨架重塑中的作用及其可能的机制。
