探讨长链非编码RNA(LncRNA)－心肌梗死相关转录物(MIAT)在转化生长因子β2(TGF-β2)诱导的晶状体上皮细胞(LECs)纤维化过程中的作用及其对后发性白内障形成的影响。
对LECs永生系SRA01/04细胞进行培养，将培养的细胞分为正常对照组和TGF-β2组，分别用DMEM培养液和含10 ng/ml TGF-β2DMEM培养液培养48 h，光学显微镜下观察TGF-β2诱导的各组细胞形态学变化，采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测细胞中MIAT及上皮－间质转化(EMT)相关标志物E－钙黏素(E-cad)、α－平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和胶原蛋白Ⅰ(CollⅠ)蛋白及其mRNA相对表达量变化；分别用siRNA空载体和siRNA-MIAT转染DMEM培养的(siNRA空载体组、siRNA-MIAT转染组)或用含10 ng/ml TGF-β2 DMEM培养的(siNRA＋TGF-β2组、siRNA-MIAT＋TGF-β2组)SRA01/04细胞48 h，光学显微镜下观察各组细胞形态学变化，采用实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测细胞中MIAT、E-cad、α-SMA、CollⅠ蛋白及其mRNA的表达变化。
正常对照组培养细胞呈圆形和多角形，TGF-β2诱导组细胞呈长梭形。与正常对照组比较，TGF-β2诱导组细胞中MIAT mRNA、α-SMA mRNA和CollⅠmRNA相对表达量明显升高(2.497±0.644 vs.0.827±0.062；2.951±0.146 vs.1.085±0.517；2.115±0.090 vs.1.002±0.088)，而E-Cad mRNA相对表达量明显下降(0.102±0.027 vs.1.020±0.262)，差异均有统计学意义(P＝0.045、0.004、0.000、0.025)，上述因子的蛋白水平表达趋势与mRNA相同。与siRNA空载体组比较，siRNA-MIAT转染组均能明显下降细胞内MIAT含量，差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siRNA＋TGF-β2组比较，siRNA-MIAT＋TGF-β2组细胞中α-SMA、CollⅠ蛋白及其mRNA相对表达量均明显下降，差异均有统计学意义(均P<0.01)，E-cad蛋白及其mRNA相对表达量明显增加，差异有统计学意义(P＝0.008、0.000)。
MIAT参与TGF-β2诱导的SRA01/04细胞EMT过程，下调MIAT可抑制晶状体上皮－间质转化的发生。
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人晶状体囊膜是由晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LECs)分泌形成的蛋白基底膜，主要由层黏连蛋白和Ⅳ型胶原蛋白相互交错而成[1]。目前囊外摘除术联合人工晶状体植入术是白内障的主流治疗方法，术后残留在晶状体前囊膜下及赤道部的LECs在外界刺激下发生上皮－间质转化(epithelial to mesenchymal transition，EMT)，即残留LECs异常增生并转分化为成纤维细胞，导致后囊膜混浊(posterior capsule opacification，PCO)，引起视力再次下降[2]。转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)是一种促纤维细胞活化因子，可诱导LECs中纤维化相关标志物的高表达[3]。TGF-β2可通过Smads、PI3K/AKT等多种生物学途径诱导LECs的纤维化，在LECs的EMT过程中发挥重要作用[4,5,6,7]，因此采用TGF-β2诱导的LECs-EMT是研究PCO病理机制的合适模型[8]，探究LECs内参与调节TGF-β2信号通路的分子机制可预防和治疗EMT相关疾病的发生及发展[9]。长链非编码RNA(long non-coding RNA，LncRNA)是一类长度大于200个核苷酸且不参与蛋白质编码过程的转录产物，多种LncRNA参与眼部常见疾病的病理机制并参与调控视网膜组织发育和晶状体老化过程[10,11,12,13]。研究发现心肌梗死相关转录物(myocardial infarction-associated transcript，MIAT)在胎盘哺乳动物中高度保守，但其可表达于有丝分裂细胞和有丝分裂后视网膜前体细胞中，并且LncRNA-MIAT参与调节乳腺癌细胞EMT过程[14]，但LncRNA-MIAT在LECs-EMT中的作用尚不清楚。EMT以上皮细胞标志物E－钙黏素(E-cadherin，E-cad)的减少及间质细胞标志物α－平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)、胶原蛋白(collagen，Coll)Ⅰ、Coll Ⅲ、纤连蛋白(fibronectin，Fn)、结缔组织生长因子表达增加为主要特征。本研究以LECs永生系SRA01/04细胞为研究对象，选取E-cad、α-SMA、CollⅠ作为观察指标，研究LncRNA-MIAT在TGF-β2诱导的LECs-EMT过程中的作用。
