检测正常人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)活化为肌成纤维细胞(MFs)过程中微小RNA(miR)-29b和p53的表达水平，探讨p53表达变化对miR-29b表达的影响。
收集安徽医科大学第一附属医院2016年3—7月行眼科斜视手术术眼正常Tenon囊组织，用组织块培养法培养出原代HTFs，传代至2～4代并进行实验。将细胞分为4个组：HTFs组细胞常规培养；TGF-β1活化组细胞用10 ng/ml TGF-β1处理；将成纤维细胞活化为肌成纤维细胞；siRNA转染组及阴性对照组分别采用含p53 siRNA以及阴性siRNA转染细胞后经10 ng/ml TGF-β1活化。分别采用免疫组织化学染色法和细胞划痕实验检测HTFs组和TGF-β1活化组细胞p53蛋白表达水平及细胞迁移能力。采用荧光定量PCR法检测各组细胞miR-29b和p53 mRNA相对表达量。
原代HTFs呈长梭形，细胞间呈螺旋状排列，TGF-β1活化后细胞转化为MFs，细胞形态不规则，排列呈无序状态。TGF-β1活化组细胞中p53蛋白染色强度显著强于HTFs组，差异有统计学意义(t＝－10.384，P<0.05)。TGF-β1活化组细胞的相对迁移距离明显大于HTFs组细胞，差异有统计学意义(t＝9.750，P＝0.000)。HTFs组、TGF-β1活化组、siRNA转染组及阴性对照组细胞中p53 mRNA相对表达量分别为1.00±0.00、3.95±2.61、0.06±0.06和0.98±0.16，miR-29b相对表达量分别为1.00±0.00、0.54±0.09、5.10±2.31和1.03±0.09，总体比较差异均有统计学意义(F＝6.688，P＝0.006；F＝13.640，P＝0.000)。TGFβ1活化组细胞p53 mRNA相对表达量显著高于HTFs组和siRNA转染组，miR-29b相对表达量显著低于HTFs组和siRNA转染组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
在HTFs转变为MFs过程中，p53显著升高，miR-29b明显降低；抑制p53表达后，miR-29b表达升高。p53与miR-29b之间可能存在相互作用来调控纤维化瘢痕的形成。
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青光眼是主要的致盲眼病之一，降眼压是其主要的治疗方法。滤过性手术可有效地降低眼压，临床上常联合使用抗代谢药物来减少术后滤过道瘢痕形成，但丝裂霉素等抗代谢药物的应用会引起一系列并发症，如术后低眼压、滤过泡渗漏、黄斑病变等，导致手术失败。因此探索更安全和有效的治疗方法来对抗青光眼术后瘢痕化，或者研发出更为优化愈合反应的药物是亟待解决的问题。人Tenon囊成纤维细胞(human Tenon capsule fibroblast，HTFs)转化为肌成纤维细胞(myofibroblast，MFs)并产生大量细胞外基质是青光眼术后滤过道瘢痕形成过程中细胞表型转化的主要特征。微小RNA(microRNA，miR)-29b是大小为20～25个核苷酸的内源性非编码小RNA。有研究报道，在心肌梗死的进程中，多种miRNA参与成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程，其中miR-29b起关键作用。在小鼠纤维化肝脏的造血干细胞中，miR-29b显著的下调。近年来，研究者发现在小梁网细胞中miR-29b可通过过表达来抑制肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TGF)-β1 mRNA和蛋白质水平的表达，进而实现对纤维化的抑制作用，但其机制尚未完全阐明。p53是一种转录调节因子，对促进纤维化基因的表达具有重要作用，并且在促纤维化的过程中，p53和TGF-β1诱导的Smad3通路具有协同作用。有研究报道，miR-29家族成员可以通过控制p85a和CDC42的表达来负向调控p53的表达。本实验检测MFs和正常未活化HTFs中miR-29b和p53的表达水平，通过siRNA抑制p53表达来观察miR-29b的变化，以期探讨青光眼滤过术后滤过道瘢痕形成的机制，为青光眼滤过性手术术后预防瘢痕形成的研究提供新的思路。
