构建小鼠视锥细胞系661W细胞凋亡模型，探讨不同自噬水平下细胞生存状态的变化。
采用不同质量浓度抗Fas抗体处理细胞，采用Western blot法检测caspase-3蛋白表达量，并确定凋亡细胞模型适宜抗Fas抗体刺激浓度；分别采用不同浓度自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和自噬诱导剂雷帕霉素处理细胞，采用Western blot法检测细胞中微管相关蛋白质1轻链3(LC-3)Ⅱ/LC-3Ⅰ蛋白表达，筛选合适的作用浓度。将细胞分为空白对照组、单纯3-MA组、单纯雷帕霉素组、模型对照组、模型＋3-MA组、模型＋雷帕霉素组，采用Western blot法检测各组细胞诱导后0、3、6、12、24和48 h caspase-3、caspase-8、自噬相关基因5(Atg-5)和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ蛋白表达，采用流式细胞术检测细胞凋亡率。
成功构建661W细胞凋亡模型，抗Fas抗体的适宜刺激质量浓度为2.0 μg/ml；在Fas抗体刺激下，661W细胞caspase-3、caspase-8相对表达量从6 h开始增加，12 h达高峰，并持续至48 h，而Atg-5和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ蛋白相对表达量从3 h开始增加，24 h达高峰，并于48 h时降至基线水平。3-MA和雷帕霉素的适宜作用浓度分别为20 nmol/L和2.0 nmol/L。空白对照组、单纯3-MA组和单纯雷帕霉素组诱导后各时间点caspase-3、caspase-8的相对表达量及细胞凋亡率总体比较，差异均无统计学意义(均P<0.05)。单纯雷帕霉素组各时间点细胞Atg-5和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ蛋白相对表达量显著高于相应时间点空白对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型＋3-MA组caspase-3、caspase-8相对表达量以及细胞凋亡率在诱导后3、6、12、24和48 h均显著高于模型对照组，Atg-5和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ的相对表达量在诱导后3、6、12和24 h均明显低于模型对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)；模型＋雷帕霉素组caspase-3、caspase-8相对表达量以及细胞凋亡率在诱导后6、12、24和48 h均显著低于模型对照组，Atg-5和LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ的相对表达量在诱导后3、6、12和24 h均明显高于模型对照组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
在抗Fas抗体诱导661W细胞凋亡条件下，增强自噬可降低细胞凋亡率，而抑制自噬则会增加细胞凋亡率，自噬可能对661W细胞起到保护性作用。
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光感受器细胞作为视网膜的一级神经元，是视觉通路的起点。研究表明各种致盲视网膜疾病，包括视网膜脱离、年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration，AMD)、视网膜色素变性等的发病原因和临床表现不尽相同，但具有共同的病理机制——光感受器细胞的死亡[1]。光感受器细胞属于中枢神经元，是一种高度特化的终末分化细胞，其受损后无法修复和再生[2]，因此可造成患者视力的不可逆性损伤，甚至盲。然而，目前这些致盲视网膜疾病中光感受器细胞死亡的确切机制尚不清楚。因此，研究光感受器细胞的死亡机制，并对其进行保护，已成为目前亟待解决的问题。细胞的死亡方式主要包括凋亡、自噬和坏死。其中，自噬作为一种存在于正常细胞和病态细胞中的非选择性降解机制，尽管被归类于细胞死亡方式的一种，但由于其具有清除细胞内代谢废物、移除异常折叠的蛋白质等功能，故又被描述为一种细胞的更新过程。细胞凋亡是神经科学研究的热点，对很多光感受器细胞死亡机制的研究较多集中在凋亡方面，并取得了重要的研究成果。然而，随着研究的深入，多项眼科疾病研究表明，自噬达到一定水平可促使光感受器细胞凋亡和坏死[3,4]。而目前，在病理情况下，对自噬水平是如何变化以影响细胞生存状态这一问题还有很多疑问。本研究通过构建小鼠661W视锥细胞系凋亡模型，并分别采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine，3-MA)和自噬激活剂雷帕霉素对661W细胞进行抑制自噬和诱导自噬的处理，观察不同自噬水平下661W细胞在诱导凋亡后不同时间点凋亡水平的变化，为自噬水平的变化对细胞生存状态的影响研究提供实验基础。
