研究肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞增生和转分化的影响。
人Tenon囊成纤维细胞进行常规培养后分为空白对照组、TGF-β1处理组及不同质量浓度HGF＋TGF-β1组。TGF-β1处理组在细胞培养液中添加10 μg/L TGF-β1，不同质量浓度HGF＋TGF-β1组在细胞培养液中分别添加10 μg/L TGF-β1，然后分别添加不同质量浓度的HGF(25、50、100、200 μg/L)，采用甲基偶氮四唑(MTT)法检测波长560 nm处各组细胞的吸光度(A560)；然后选用100 μg/L的HGF进行干预，采用细胞免疫荧光染色技术检测人Tenon囊成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达分布；采用Western blot法检测细胞中α-SMA蛋白的相对表达量。
体外培养的人Tenon囊成纤维细胞呈长梭形，边界清楚，细胞中波形蛋白表达阳性并定位于细胞质。MTT检测显示空白对照组、TGF-β1处理组及HGF25 μg/L＋TGF-β1组、HGF50 μg/L＋TGF-β1组、HGF100 μg/L＋TGF-β1组、HGF200 μg/L＋TGF-β1组细胞的增生值分别为0.203±0.025、0.497±0.101、0.426±0.062、0.354±0.040、0.272±0.084和0.241±0.011，组间比较差异有统计学意义(F＝9.210，P＝0.003)，TGF-β1处理组细胞增生值明显高于空白对照组，不同质量浓度HGF＋TGF-β1组细胞增生值均明显低于TGF-β1处理组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。免疫荧光染色结果显示空白对照组细胞中未见α-SMA的表达，TGF-β1处理组及HGF100 μg/L＋TGF-β1组细胞的胞质中均可见α-SMA的表达，呈红色荧光，HGF100 μg/L＋TGF-β1组细胞中α-SMA表达荧光减弱，α-SMA表达细胞明显减少。TGF-β1处理组和HGF100 μg/L＋TGF-β1组细胞中α-SMA染色阳性细胞百分比分别为(60.0±4.7)%和(14.3±3.1)%，差异有统计学意义(t＝19.856，P<0.001)。Western blot检测显示空白对照组、TGF-β1处理组和HGF100 μg/L＋TGF-β1组细胞中α-SMA蛋白相对表达量分别为0.642±0.032、1.330±0.069和0.884±0.040，总体比较差异有统计学意义(F＝13.370，P<0.001)，其中TGF-β1处理组细胞中α-SMA蛋白相对表达量明显高于空白对照组，HGF100 μg/L＋TGF-β1组细胞中α-SMA蛋白相对表达量明显低于TGF-β1处理组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
HGF抑制TGF-β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞的过度增生，下调细胞中α-SMA蛋白的表达，阻止成纤维细胞的表型转化。
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目前青光眼滤过术仍是临床上治疗青光眼的主要手术方式，术后滤过区纤维瘢痕的形成是手术失败的主要原因，术后成纤维细胞的异常增生、肌成纤维细胞的收缩以及细胞外基质的合成增多等是引起滤过区纤维瘢痕的主要病理机制[1]。研究表明，转化生长因子-β(transforming growth factor，TGF-β)在伤口愈合的过程中发挥重要作用，可诱导人Tenon囊成纤维细胞增生，并介导细胞转分化为α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)表达阳性的肌成纤维细胞，因此其在促进伤口愈合的同时也与滤过泡纤维瘢痕化密切相关[2]。肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)是能阻止肝肾等组织器官纤维化的细胞生长因子之一[3]，但其对人眼Tenon囊成纤维细胞的影响鲜见报道。根据以往学者的研究经验，人Tenon囊成纤维细胞体外培养是进行青光眼术后滤过区抗纤维化研究良好的靶细胞[4]。本研究采用体外培养人Tenon囊成纤维细胞，探讨HGF对抗青光眼滤过手术后滤过泡纤维瘢痕化过程中成纤维细胞增生及转分化的影响。
