实验研究
高表达Krüppel样因子6对紫外线B诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响
中华实验眼科杂志, 2019,37(4) : 257-262. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2019.04.004
摘要
目的

探讨Krüppel样因子6(KLF6)高表达对于紫外线B(UVB)诱导晶状体上皮细胞(HLECs)凋亡的影响。

方法

利用脂质体转染的方法将已成功构建的真核表达质粒pEGFP-C2-KLF6转染到HLECs中,采用Western blot法测定细胞中KLF6蛋白的表达水平;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染后细胞活力;经苏木精-伊红染色法观察细胞形态;采用Live/Dead染色法观察细胞受损情况;采用Western blot法检测细胞中凋亡标志物bax和bcl-2的相对表达量,并计算bax/bcl-2比值;采用细胞凋亡检测试剂盒定量测定细胞凋亡水平,并检测细胞中活性氧簇(ROS)的表达水平。

结果

0.5 μg转染组和1.0 μg转染组细胞生存力较空载体对照组下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。KLF6高表达组细胞稀疏,细胞形态狭长,细胞质浓缩。正常对照组细胞形态稳定,数量均匀,为绿色活细胞;KLF6高表达组红色死亡细胞数量显著增多。UVB照射后,KLF6高表达组HLECs细胞凋亡值、bax相对表达量、bax/bcl-2比值、ROS表达量均高于空载体对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。

结论

高表达的KLF6通过调控凋亡相关蛋白的表达及促进内质网内ROS堆积来加剧UVB照射导致的HLECs凋亡,提示KLF6参与HLECs的凋亡调控。通过生物学手段特异性下调KLF6的表达有可能在一定程度上发挥对HLECs的保护作用。

引用本文: 田芳, 赵今稚, 黄亮瑜, 等.  高表达Krüppel样因子6对紫外线B诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的影响 [J] . 中华实验眼科杂志, 2019, 37(4) : 257-262. DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2019.04.004.
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白内障是由多种因素导致的晶状体混浊,病因多为先天因素或后天全身营养代谢异常、中毒变性等。白内障的发病机制尚不明确,其中人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)凋亡是除先天性白内障以外所有类型白内障形成的细胞学基础,UVB照射造成的氧化损伤则是LECs凋亡的重要诱发因素。Krüppel样因子6(Krüppel like factor 6,KLF6)是肿瘤抑制因子,在Schwann细胞中其可通过上调Fas表达而调控凋亡反应[1]。高表达的KLF6可以调节p21和p27(kip1)的表达,从而抑制细胞增生并降低LECs的细胞活力[2]。本课题组的前期研究结果显示,上调KLF6蛋白表达水平可抑制胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)诱导的HLECs增生,提示KLF6是LECs功能的潜在调控因子[3]。鉴于KLF6在细胞增生以及凋亡中的调控作用并结合氧化损伤对白内障发生和发展中的影响,本研究中拟观察KLF6对于紫外线B(ultraviolet B,UVB)诱导的HLECs氧化损伤的影响,为通过干预KLF6来控制白内障提供依据。

 
 
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