研究长链非编码RNA(LncRNA)肺癌相关转录产物1(LUCAT1)靶向微小RNA(miR)-502-5p对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞增生、迁移和侵袭的影响。
收集2019年5月至2021年1月在河南省立眼科医院确诊并行眼球摘除术的27例RB患者的RB组织样本，正常视网膜组织标本(12例眼球破裂伤、7例眼球萎缩、8例眼球穿通伤合并有色素膜嵌顿)取自同期在河南省立眼科医院行眼球摘除术的27例患者。采用实时荧光定量PCR检测LncRNA LUCAT1和miR-502-5p在RB组织、细胞系(Y-79、WERI-Rb-1、HXO-RB44)及人视网膜上皮细胞(ARPE-19)中的表达。将RB细胞Y-79分为对照组、小干扰RNA(si)-LncRNA LUCAT1组、si-对照(con)组、pcDNA组、pcDNA-LncRNA LUCAT1组、miR-con组、miR-502-5p组、si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组和si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组，分别转染相应试剂。采用Western blot法检测MMP2和MMP9蛋白表达；采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增生活力；采用克隆形成实验检测细胞增生能力；采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验和实时荧光定量PCR验证LncRNA LUCAT1对miR-502-5p的靶向调控作用。
RB组织中LncRNA LUCAT1表达量为2.73±0.34，明显高于正常视网膜组织的1.00±0.15；miR-502-5p表达量为0.42±0.06，明显低于正常视网膜组织的1.00±0.13，差异均有统计学意义(t＝24.190、21.049，均P<0.001)。人RB细胞系Y-79、WERI-Rb-1和HXO-RB44中LncRNA LUCAT1表达水平明显高于ARPE-19细胞，miR-502-5p表达水平明显低于ARPE-19细胞，差异均有统计学意义(均P<0.05)。si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量，MMP2、MMP9蛋白相对表达量，吸光度(A)值，细胞增生、迁移、侵袭数量较对照组均明显减少，差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-502-5p组miR-502-5p表达量高于miR-con组，MMP2、MMP9蛋白相对表达量，细胞活力A值，细胞增生、迁移、侵袭数量少于miR-con组，差异均有统计学意义(t＝20.274、14.884、14.181、12.692、17.749、20.889、21.913，均P<0.001)。si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-502-5p组miR-502-5p表达量低于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组，MMP2、MMP9蛋白相对表达量，细胞活力A值，细胞增生、迁移、侵袭数量高于si-LncRNA LUCAT1+anti-miR-con组，差异均有统计学意义(t＝14.097、15.839、15.757、11.860、16.235、16.565、16.487，均P<0.001)。与LncRNA LUCAT1-野生型共转染时，miR-502-5p组相对荧光素酶活性值低于miR-con组，差异有统计学意义(t＝16.379，P<0.001)。pcDNA-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量高于pcDNA组，miR-502-5p表达量低于pcDNA组，si-LncRNA LUCAT1组LncRNA LUCAT1表达量低于si-con组，miR-502-5p表达量高于si-con组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。
抑制LncRNA LUCAT1表达通过靶向上调miR-502-5p可减弱人RB细胞的增生、迁移和侵袭能力。
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视网膜母细胞瘤(retinoblastoma，RB)是儿童常见的眼内恶性肿瘤，其主要发生于视网膜核层，容易发生颅内及远处转移，严重影响儿童视力，甚至危及生命。目前临床已有的眼球摘除术、化学疗法、放射疗法、激光光凝和基因治疗等RB治疗方法均存在一定的不足，基因治疗由于具有靶向作用及不良反应较小的特点而逐渐成为众多研究的焦点[1,2,3,4]。长链非编码RNA(long noncoding RNA，LncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的调节性RNA，其可通过吸附微小RNA(microRNA，miRNA)调控靶mRNA表达，参与肿瘤的迁移和侵袭过程。LncRNA已在多种类型肿瘤中用作治疗靶点及预后标志物[5,6]。肝癌组织中LncRNA肺癌相关转录产物1(lung cancer associated transcript 1，LUCAT1)表达增加，LncRNA LUCAT1高表达与肝癌患者总生存期较差相关[7]。LncRNA LUCAT1通过靶向miR-5702促进肿瘤细胞增生、细胞周期进程和转移以及减少细胞凋亡，进而促进三阴性乳腺癌的进展[8]。RB细胞与上述肿瘤细胞生物学行为相似，但LncRNA LUCAT1在RB中的表达和调节作用并不清楚。miR-502-5p是一种抑癌因子，研究报道miR-502-5p可促进乳腺癌细胞早期凋亡，抑制其增生[9]。在卵巢癌中，miR-502-5p可通过靶向GINS2抑制癌细胞的体外增生、迁移和侵袭能力[10]。生物信息学分析显示，miR-502-5p是LncRNA LUCAT1的潜在靶点。因此，本研究旨在阐明LncRNA LUCAT1和miR-502-5p在人RB细胞增生、迁移和侵袭中的作用，探讨LncRNA LUCAT1和miR-502-5p的靶向关系，为RB靶向治疗提供新的靶点。
