探讨干扰hsa_circ_0103232对葡萄膜黑色素瘤C918和MUM2B细胞增殖、迁移、细胞周期及凋亡的影响。
培养C918和MUM2B细胞株，通过实时荧光定量PCR分别检测3个靶向hsa_circ_0103232的小干扰RNA(siRNA)的干扰效果，并选择干扰效果最好的siRNA进行后续实验。将C918和MUM2B细胞均分为阴性对照转染(siCtrl)组和干扰(si-hsa_circ_0103232)组，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和细胞克隆形成实验检测细胞增殖情况；采用Transwell实验检测细胞迁移情况；采用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况；采用荧光原位杂交实验检测hsa_circ_0103232在细胞中的定位。
实时荧光定量PCR结果显示，3个靶向hsa_circ_0103232的siRNA中，以si-hsa_circ_0103232#1的靶点效果最好，在C918和MUM2B细胞中的干扰后表达水平分别为0.263±0.016和0.469±0.028，显著低于对照组的1.013±0.008和1.004±0.108(均P<0.001)。CCK-8结果显示，与siCtrl组相比，si-hsa_circ_0103232组C918和MUM2B细胞增殖活力在转染后不同时间均显著降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)；细胞克隆形成实验结果显示，si-hsa_circ_0103232组C918和MUM2B细胞形成克隆数分别为(12±1)和(45±7)个，分别少于siCtrl组的(28±4)和(83±3)个，差异均有统计学意义(t＝4.93、7.42，均P<0.05)；Transwell实验结果显示，si-hsa_circ_0103232组C918和MUM2B细胞迁移数量分别为(4±1)和(24±2)个，分别少于siCtrl组的(37±12)和(57±3)个，差异均有统计学意义(t＝3.91、10.80，均P<0.05)；流式细胞术检测结果显示，与siCtrl组相比，si-hsa_circ_0103232组C918和MUM2B细胞中G1期细胞的比例均明显升高、G2/M期比例均显著下降，细胞凋亡率均显著升高，差异均有统计学意义(均P<0.05)；荧光原位杂交实验结果显示，hsa_circ_0103232在C918和MUM2B细胞中定位在细胞核。
干扰hsa_circ_0103232可抑制C918和MUM2B细胞增殖、迁移和周期进程，并促进细胞凋亡。hsa_circ_0103232可能成为葡萄膜黑色素瘤新的治疗靶点。
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葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma，UM)是成年人常见的原发性眼内恶性肿瘤，具有恶性程度高、发病隐匿的特点，严重威胁患者的视力乃至生命安全。UM起源于眼球壁的中间葡萄膜层，包括虹膜、睫状体及脉络膜，具有高度侵袭性，约50%的患者会出现转移性UM[1,2,3,4]。目前，对于UM缺乏有效的治疗手段，患者的预后和生存率较差，UM发生转移后整体的生存时间为10～12个月[5,6]。因此，深入了解UM的分子机制，进而确定更有效的生物标志物和治疗靶点，对其早期临床诊断、制定预防和治疗策略具有重要意义。环状RNA(circular RNA，circRNA)是一种新型内源性非编码RNA，被认为是哺乳动物中一类稳定的调节转录物[7,8]。circRNA由"反向剪接"反应产生，具有特征性的共价闭环结构，并且在特定细胞类型或发育阶段中特异性表达[9,10,11]。circRNA具有选择性保守的微小RNA(microRNA，miRNA)靶位点，可以通过miRNA海绵调节下游基因的表达[12]。近年来研究表明，circRNA具有保守性、稳定性、丰富性以及动态性的特点，使其成为新型临床诊断与治疗的重要靶点及标志物；同时，circRNA广泛存在于胶质瘤、乳腺癌、肝癌等多种肿瘤中，是肿瘤发生和发展的重要调节因子[13]。目前，已有部分circRNA被发现可作为皮肤黑色素瘤的潜在靶标，如circ_0062270[14]等，但是circRNA在UM中的研究较匮乏。本课题组先前研究比较circRNA在UM组织和正常葡萄膜组织中的表达[15]，探讨了多个circRNA作为UM诊断与预后标志物的可能，发现与正常葡萄膜组织相比，hsa_circ_0103232在UM组织中呈高表达，表明hsa_circ_0103232有望成为UM治疗新的潜在靶点。此外，Lin等[16]研究发现hsa_circ_0103232可能通过miR-661增强RAB3D的表达来促进皮肤黑色素瘤(SKMel1、A375和A875)的进展，进一步提示了hsa_circ_0103232在黑色素瘤中的作用。但尚未见hsa_circ_0103232对UM细胞作用的研究报道。本研究旨在探讨干扰hsa_circ_0103232对UM细胞C918和MUM2B增殖、迁移、周期和凋亡的影响。
