对比一步法和两步法建立5/6肾切除肾衰模型的效果。
使用一步法和两步法建立5/6肾切除肾衰模型，观察2组死亡率以及术后4、8、12周肌酐、尿素氮的水平。
一步法组术后4周死亡率17.65%，二步法组术后4周死亡率29.41%，2组均成功建立肾衰模型，且术后8周2组肌酐、尿素氮水平无统计学差异。
一步法和两步法均可成功建立5/6肾切除肾衰模型，一步法建立5/6肾切除肾衰模型死亡率可能更低。
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慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）为各种慢性肾脏病持续进展的共同结局，它是以代谢产物潴留，水、电解质及酸碱代谢失衡和全身各系统症状为表现的一种临床综合征[1]。我国慢性肾衰竭发病率约为100/百万人口，男女发病率分别为55%和45%，高发年龄为40~50岁[2]，慢性肾脏病的防治已成为世界各国所面临的重要公共卫生问题，近年来慢性肾脏病的患病率有明显上升趋势，而慢性肾衰竭进展的机制尚未完全阐明，因此建立合适的CRF的动物模型，对研究以及探讨CPF的病因、发病机制、组织形态学的变化及生化指标的变化极其重要。大鼠、兔、狗等均是建立模型的理想动物，但由于大鼠和人体的解剖结构相似，耐受力很强，而且对外科感染有更强的抵抗力，所以相对于其他动物，大鼠的使用率更高[3]。目前主要的手术方法为2次手术行5/6肾切除[4]，也有报道使用改良5/6肾切除法[5]，均为2次手术后建立动物模型，近年来也有报道使用一步法建立模型的报道[6]，但两种模型的建立方法是否存在差别，目前并无报道，因此本研究对两种手术方法建立的模型进行了对比分析，为今后CRF动物模型的制备提供部分参考依据。
10周龄成年雄性SD大鼠40只，体质量250~300 g，由第二军医大学动物实验中心提供。每5只一笼，适应性喂养1周。
随机分为3组，假手术组6只、一步法手术组17只、两步法手术组17只。术前秤重大鼠，先以10%水合氯醛（0.35 ml/100 g）腹腔注射麻醉大鼠后，一步法组使大鼠俯卧固定于手术台上以暴露背部左肾区，用剪刀剪去以最后肋骨稍后方为中心的毛，消毒、铺巾。从距左脊肋骨1.5 cm处斜向外下方切口，暴露左侧肾，分离肾周围脂肪囊，剥离肾包膜，弧形切除左肾上下级各1/3，可吸收止血纱布黏贴切面止血，复位残余肾，逐层缝合后，即于右脊肋骨1.5 cm处切口，剥离右肾，结扎肾蒂，行右肾全切，缝合皮肤。共切除肾脏约5/6左右。两步法手术组麻醉后固定于手术台上，剪毛，消毒，同样的方法，分离左肾周围脂肪囊，剥离肾包膜，弧形切除左肾上下级各1/3，可吸收止血纱布黏贴切面止血，复位残余肾，逐层缝合后，术后1周行第2次右肾切除手术。两次手术共切除肾约5/6。假手术组麻醉后作背部切口，剥离左右肾包膜，即缝合皮肤。
观察大鼠精神状态、活动度、毛发光泽度、摄食情况及死亡情况，分别于术后4、8、12周经内眦取血，检测血清肌酐、尿素氮（使用Cobas c 111全自动生化分析仪）。
使用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计数资料比较使用χ2检验，所有计量资料使用
±s表示，组间差异使用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
实验第4周时，假手术组死亡1只，两步法组死亡5只，一步法组死亡3只，实验第12周时假手术组死亡1只，两步法组死亡增加至6只，一步法组死亡增加至4只。详见表1。
各组死亡率情况比较[只（%）]
各组死亡率情况比较[只（%）]
| 组别 | 只数 | 4周死亡率 | 8周死亡率 |
|---|---|---|---|
| 假手术组 | 6 | 1（16.67） | 1（16.67） |
| 两步法组 | 17 | 5（29.41） | 6（35.29） |
| 一步法组 | 17 | 3（17.65）a | 4（23.53）a |
注：与假手术组比较，aP>0.05
实验结束时，假手术组大鼠被毛光泽，饮食无异常。一步法、两步法组大鼠均逐渐出现精神萎靡，被毛疏松不齐，无光泽，耳部变白。
一步法组、两步法组大鼠随时间延长，血清肌酐、尿素氮均明显升高，一步法、两步法组与假手术组比较均有统计学差异，详细结果见表2，表3。
各组实验大鼠血清肌酐水平的比较（μmol/L，
±s）
各组实验大鼠血清肌酐水平的比较（μmol/L，±s）
| 组别 | 只数 | 4周 | 8周 | 12周 |
|---|---|---|---|---|
| 假手术组 | 6 | 42.33±9.63 | 41.57±7.24 | 40.26±10.24 |
| 一步法手术组 | 17 | 86.42±15.61a | 100.22±17.84a | 164.33±20.82a |
| 两步法手术组 | 17 | 60.73±11.52a | 105.72±15.36a | 154.82±19.67a |
注：a与假手术组相比，P<0.05
各组实验大鼠血清尿素氮水平的比较（mmol/L，
±s）
各组实验大鼠血清尿素氮水平的比较（mmol/L，±s）
| 组别 | 只数 | 4周 | 8周 | 12周 |
|---|---|---|---|---|
| 假手术组 | 6 | 6.67±2.03 | 6.89±1.94 | 6.73±1.71 |
| 一步法手术组 | 17 | 12.36±3.42a | 14.72±4.72a | 16.33±4.29a |
| 两步法手术组 | 17 | 10.38±1.84a | 15.36±4.89a | 15.98±5.33a |
注：a与假手术组相比，P<0.05
慢性肾衰竭模型的制作方法有很多，如腺嘌呤喂食法、肾动脉结扎法、理化破坏肾皮质、氟化钠诱导法等，其中5/6肾切除模型是因减少有效肾单位，造成肾小球内高灌注、高滤过，使肾小球硬化、残余肾单位继续损伤病理过程，符合人肾衰的过程[7]，所以动物实验中使用最多的还是5/6肾切除法。而5/6肾切除模型的具体制备方法也有很多，两步法5/6肾切除法、改良两步法5/6肾切除法、一步法5/6肾切除法，至于具体哪种方法更好，尚无定论。根据本实验可以看出大鼠多死于术后4周内，分析可能与手术应激、手术前麻醉、术后感染、急性肾损伤有关，虽然统计学分析显示，两步法组和一步法组4周、8周死亡率差异无统计学意义，但两步法组死亡率均高于一步法组，推测如果样本量继续增大，可能会有差异。而且一步法组手术应激次数、麻醉次数均少，可以将手术对实验大鼠的打击减少到最低，分二次手术增加了麻醉意外和手术感染的几率，也增加了操作者的工作量。在模型评估方面，一步法组和两步法组的肌酐、尿素氮水平均高于假手术组，说明2组模型均建模成功，且8、12周时一步法组和两步法组的肌酐、尿素氮水平差异无统计学意义，可以证实，一步法建立5/6肾切除模型的方法，完全可以替代两步法建立5/6肾切除模型的方法，甚至可能优于两步法。
