探讨p16/微小染色体维持蛋白(MCM)2和p16/Ki-67免疫组织化学双重染色，对高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)呈阳性妇女宫颈病变的筛查效果。
选择2015年4月至10月，于四川省成都市双流区招募的符合本研究纳入、排除标准，并且于四川大学华西第二医院进行HPV DNA检测，诊断为HR-HPV呈阳性的62例妇女为研究对象。采集这62例HR-HPV呈阳性受试者的宫颈脱落细胞学标本，均采取新柏薄层液基细胞学检查(TCT)及p16/MCM2、p16/Ki-67免疫细胞化学双重染色。对于HPV-16、-18呈阳性，或其他12种HR-HPV(HPV-31、-33、-35、-39、-45、-51、-52、-56、-58、-59、-66、-68)呈阳性，并且TCT结果为≥未明确意义的非典型鳞状细胞(≥ASCUS)的受试者，均进行阴道镜检查，若阴道镜检查结果异常，再进行宫颈活组织检查。统计学比较p16/MCM2、p16/Ki-67双重染色与TCT，对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的敏感度、特异度、受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)，评估p16/MCM2和p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的有效性。本研究经过四川大学医学伦理委员会批准(批准编号：K2014018)。所有受试者均同意参加宫颈癌筛查，并签署临床研究知情同意书。
①纳入本研究的62例HR-HPV呈阳性受试者中，p16/Ki-67、p16/MCM2阳性率，均随宫颈病变程度增高而呈上升趋势(χ2＝21.947，P<0.001；χ2＝5.268，P＝0.022)。TCT阳性率与宫颈病变程度无显著相关性(χ2＝1.850，P＝0.174)。②HPV-16、-18呈阳性受试者的p16/Ki-67阳性率为69.2%(9/13)，显著高于其他12种HR-HPV呈阳性受试者的36.7%(18/49)，并且差异有统计学意义(χ2＝4.413，P＝0.036)。HPV-16、-18呈阳性受试者与其他12种HR-HPV呈阳性受试者的p16/MCM2阳性率相比较，差异无统计学意义(χ2＝2.510，P＝0.113)。③TCT及p16/Ki-67、p16/MCM2双重染色，对纳入本研究的62例HR-HPV呈阳性受试者的宫颈病变筛查的敏感度分别为47.1%(8/17)、94.1%(16/17)、88.2%(15/17)，特异度分别为68.9%(31/45)、75.6%(34/45)、42.2%(19/45)。p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC-AUC为0.848，显著大于TCT的0.580，二者比较，差异有统计学意义(Z＝2.736，P＝0.006)。p16/MCM2双重染色和TCT对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC-AUC相比较，差异无统计学意义(Z＝0.651，P＝0.515)。
p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性妇女宫颈病变筛查的敏感度和特异度，均高于TCT。该方法操作简单，结果容易判读，有望成为医疗资源严重短缺地区的HR-HPV呈阳性妇女阴道镜转诊分流的有效方法。p16/MCM2双重染色对HR-HPV呈阳性妇女宫颈病变的筛查效果，有待进一步研究、证实。
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宫颈癌是全球第4大常见女性恶性肿瘤。2012年，全球约有53万例宫颈癌新发病例和27万例宫颈癌死亡病例[1]。其中，85%以上宫颈癌新发病例发生在贫困地区，约占所有女性恶性肿瘤的12%[1]。虽然人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)预防性疫苗已经上市，但是，宫颈癌筛查，仍然是目前全球预防宫颈癌的主要手段[2]。多年来，中国开展宫颈癌筛查面临的困境是细胞病理学医师严重缺乏，细胞学诊断质量差。2013年，世界卫生组织(World Health Organization，WHO)建议将HPV检测，作为宫颈癌一线筛查方法单独使用[3]。但是，多数HPV感染是一过性的、可被机体自动清除的，并不会导致病变，将所有HPV呈阳性妇女直接转诊至阴道镜检查，将造成过度诊疗。因此，寻找新的生物学标志物，对HPV呈阳性妇女是否需进一步进行阴道镜检查进行评估，是临床迫切需要解决的问题。
高危型人乳头瘤病毒(high risk human papilloma virus，HR-HPV)的E7蛋白，可竞争性抑制细胞周期蛋白质依赖性激酶(cyclin-dependent kinases，CDK)4与视网膜母细胞瘤蛋白质(retinoblastoma protein，pRb)相结合。E7蛋白与pRb结合，可导致pRb对E2F家族转录因子的抑制作用失活，E2F家族转录因子被释放。这些游离的E2F家族转录因子，可激活许多参与G1/S期调控点的细胞周期调控基因，从而使具有增殖潜能的宫颈细胞过度表达p16。文献报道，在宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和宫颈癌中，利用免疫组织化学技术，可检测到p16表达呈阳性，并且p16阳性率随宫颈病变加重而升高[4]。目前，病理学医师已经利用p16免疫组织化学染色作为辅助诊断CIN的方法之一，以提高临床诊断CIN的准确性。文献报道，采用p16免疫组织化学染色，可对HPV呈阳性妇女是否需进一步进行阴道镜检查进行评估[5,6]。但是，p16表达呈阳性也可出现于宫颈化生细胞、萎缩细胞和正常柱状细胞中，并且p16免疫组织化学染色结果易受细胞学标本量的影响，对于宫颈病变筛查的特异度较差。
细胞核抗原Ki-67表达于G0期以外的所有细胞周期中，可作为评价细胞增殖的生物学标志物。微小染色体维持蛋白(minichromosome maintenance protein，MCM)2是真核生物DNA复制的主要调节因子，在DNA复制起始和延伸过程中发挥着重要作用。MCM2通过在DNA复制前，将复合物加载于DNA上，并通过解旋酶活性解链DNA，启动DNA合成，进而参与所有真核细胞的DNA复制[7,8]。文献报道，由MCM2和拓扑异构酶Ⅱα(topoisomerase Ⅱ alpha，TOP2A) 2种抗体组成，被称为ProExC的免疫组织化学检测技术，已被作为鳞状上皮内病变的辅助诊断方法应用于临床[9,10]。迄今尚未见有关p16和MCM2抗体联合，作为肿瘤相关生物学标志物的文献报道[10]。本研究探讨p16/Ki-67和p16/MCM2免疫细胞化学双重染色，对HR-HPV呈阳性妇女宫颈病变筛查的临床有效性，旨在寻找对HR-HPV呈阳性妇女阴道镜转诊进行分流的有效方法。现将研究结果报道如下。
选择2015年4月至10月，于四川省成都市双流区招募的，符合本研究纳入、排除标准，并且于四川大学华西第二医院进行HPV DNA检测，诊断为HR-HPV呈阳性的62例妇女为研究对象。其中，HPV-16、-18呈阳性者为13例，其他12种HR-HPV(HPV-31、-33、-35、-39、-45、-51、-52、-56、-58、-59、-66、-68)呈阳性者为49例。本研究纳入标准：受试者年龄为35～64岁，无恶性宫颈疾病史，非妊娠期妇女，HPV DNA检测结果为HR-HPV呈阳性者，了解本研究程序并签署临床研究知情同意书者。排除标准：排除宫颈脱落细胞新柏液基薄层细胞学检查(ThinPrep liquid-based cytology test，TCT)结果不满意者，细胞标本不足，无法满足进行p16/Ki-67和p16/MCM2双重染色者。本研究经过四川大学医学伦理委员会批准(批准编号：K2014018)。所有受试者均同意参加宫颈病变筛查，并签署临床研究知情同意书。
p16/Ki-67检测试剂盒(批号：2015087722，福州迈新生物技术开发有限公司)；p16/MCM2检测试剂盒(批号：201500011，福州迈新生物技术开发有限公司)；HPV基因分型试剂盒(批号：198001，上海之江生物科技股份有限公司)；新柏细胞保存液(美国Hologic公司)。
与本研究的每位受试者签署临床研究知情同意书后，由本院妇科医师使用宫颈刷，收集每位受试者的宫颈脱落细胞标本1份，并转移至新柏细胞保存液中，制备成细胞学标本，用于HPV DNA检测、TCT及p16/Ki-67、p16/MCM2双重染色。
取每位受试者1.2.2中制备的宫颈脱落细胞标本1 mL，分别使用HPV基因分型试剂盒进行检测。该试剂盒通过核酸杂交技术，检测HPV DNA，可检测14种HR-HPV，包括HPV-16、-18，以及其他12种HR-HPV(HPV-31、 -33、 -35、-39、-45、-51、-52、-56、-58、-59、-66、-68)。所有HPV DNA检测步骤，均严格按照HPV基因分型试剂盒操作说明书进行。
取每位受试者1.2.2中制备的宫颈脱落细胞标本15 mL进行制片，用于TCT。所有受试者的宫颈脱落细胞TCT结果的阅片工作，均由四川大学华西第二医院2位经验丰富的细胞病理学医师独立进行。若其诊断结果不一致时，则由第3位高年资细胞病理学医师再次阅片，若这3位细胞病理学医师中至少2位的意见一致，则将2位意见一致的结果，作为最终诊断结果。细胞学诊断结果，严格按照TBS诊断系统(宫颈/阴道细胞学诊断报告方式，the Bathesda system)术语进行描述。其中，将TCT结果呈阳性定义为≥未明确意义的非典型鳞状细胞(atypical-squamous cells of undetermined signification，ASCUS)；反之，则为TCT结果呈阴性。
对所有受试者1.2.2中剩余宫颈脱落细胞标本分别进行制片后，均进行p16/Ki-67和p16/MCM2双重染色。采用含有针对p16蛋白的小鼠单克隆抗体(MX007)和兔抗人Ki-67单克隆抗体的p16/Ki-67检测试剂盒，对宫颈脱落细胞标本进行p16/Ki-67双重染色，具体操作步骤严格按照p16/Ki-67检测试剂盒说明书进行。采用含有针对p16蛋白的小鼠单克隆抗体(MX007)和兔抗人MCM2单克隆抗体(SP85)的p16/MCM2检测试剂盒，对宫颈脱落细胞标本进行p16/MCM2双重染色，具体操作步骤严格按照p16/MCM2检测试剂盒说明书进行。p16/Ki-67和p16/MCM2双重染色结果判读，均采用盲法阅片、判读。p16/Ki-67双重染色结果判读标准为：至少1个宫颈上皮细胞同时显示细胞质呈红色(p16)和细胞核呈褐色(Ki-67)者，则被定义为p16/Ki-67呈阳性；反之，则被定义为p16/Ki-67呈阴性。p16/MCM2双重染色结果判读标准为：至少1个宫颈上皮细胞同时显示细胞质呈红色(p16)和细胞核呈黄褐色(MCM2)者，则被定义为p16/MCM2呈阳性；反之，则被定义为p16/MCM2呈阴性。
对于HPV DNA检测结果为HPV-16、-18呈阳性者，或其他12种HR-HPV(HPV-31、-33、-35、-39、-45、-51、-52、-56、-58、-59、-66、-68)呈阳性，而且TCT结果为≥ASCUS者，则转诊阴道镜检查，如果阴道镜检查结果异常，则进行宫颈活组织病理学检查。阴道镜检查在HPV DNA检测诊断为HR-HPV呈阳性后的1个月内完成。对于阴道镜检查结果异常者，在宫颈可疑病变部位或异常部位取多点活组织进行病理学检查(推荐4个象限)，在每个象限最严重的病变部位取活组织进行病理学检查；当鳞柱交界上移至宫颈管或病变伸入宫颈管时，采取宫颈管内膜刮取术，取活组织进行病理学检查。对手术获取的活组织病理学检查标本，应立即使用10%中性缓冲福尔马林溶液固定24 h后，进行常规石蜡包埋、切片和检查，这些操作均由四川大学华西第二医院病理科医师完成。对于活组织病理学检查结果，首先由2位组织病理学医师独立阅片、诊断，其诊断结果不一致时，再由第3位高年资组织病理学医师再次阅片，3位组织病理学医师中至少2位的意见一致时，则将2位意见一致的结果，作为最终诊断结果。对于宫颈管内膜组织的病理学诊断标准，参照WHO肿瘤分类及诊断标准，包括正常宫颈组织，CIN1、2、3，以及鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)和腺癌。如果1例受试者有多个活组织病理学检查标本，则将最严重的病变级别，作为该例受试者最终活组织病理学诊断结果。
因本研究为国家宫颈癌筛查计划下开展的一项基于人群的流行病学调查研究，无法对所有HR-HPV呈阳性受试者均进行宫颈活组织病理学检查。对于30例进行了宫颈活组织病理学检查的受试者，宫颈病变最终诊断结果以宫颈活组织病理学检查结果为准。其中，宫颈活组织病理学检查结果诊断为CIN2、3及SCC和腺癌者，记为CIN2＋(即活组织病理学诊断结果≥CIN2)，最终诊断为宫颈病变呈阳性；宫颈活组织病理学检查诊断为正常或CIN1者，最终诊断为宫颈病变呈阴性[11]。对于32例未进行宫颈活组织病理学检查的受试者，即其他12种HR-HPV(HPV-31、 -33、 -35、-39、-45、-51、-52、-56、-58、-59、-66、-68)呈阳性，但是TCT结果呈阴性者(19例)，以及转诊阴道镜检查但检查结果呈阴性者(13例)，均判断为正常人群，其宫颈病变最终诊断结果均为宫颈病变呈阴性[11] 。
本研究数据采用SPSS 19.0统计学软件包进行统计学分析。采用Ssize软件确定满足本研究统计检验的最小样本量。对于p16/Ki-67、p16/MCM2阳性率等计数资料，采用率(%)表示；不同宫颈病变的HR-HPV呈阳性受试者p16/Ki-67、p16/MCM2阳性率比较，采用线性趋势χ2检验；HPV-16、-18呈阳性者与其他12种HR-HPV呈阳性者的p16/Ki-67、p16/MCM2阳性率比较，采用四格表χ2检验。通过计算TCT及p16/Ki-67、p16/MCM2双重染色，对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的敏感度、特异度，评估这3种方法对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的准确性。计算这3种方法对HR-HPV呈阳性者宫颈病变筛查的受试者工作特征(receiver operator characteristic，ROC)曲线下面积(area under curve，AUC)，并采用Z检验进行比较。以P<0.05表示差异有统计学意义。
本研究62例HR-HPV呈阳性受试者中，p16/Ki-67、p16/MCM2阳性率，均随宫颈病变程度增高而呈上升趋势(χ2＝21.947，P<0.001；χ2＝5.268，P＝0.022)。TCT阳性率与宫颈病变程度无显著相关性(χ2＝1.850，P＝0.174)。3种宫颈病变筛查方法在不同宫颈病变的HR-HPV呈阳性受试者中的阳性率比较，见表1。
3种宫颈病变筛查方法在不同宫颈病变的62例HR-HPV呈阳性受试者中的阳性率比较
3种宫颈病变筛查方法在不同宫颈病变的62例HR-HPV呈阳性受试者中的阳性率比较
| 宫颈病变筛查方法 | 正常[%(n/n′)] | CIN1[%(n/n′)] | CIN2[%(n/n′)] | CIN3[%(n/n′)] | 宫颈癌(n/n′) | χ2值 | P值 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| p16/Ki-67双重染色法 | 23.7(9/38) | 28.6(2/7) | 100.0(3/3) | 91.7(11/12) | 2/2 | 21.947 | <0.001 |
| p16/MCM2双重染色法 | 55.3(21/38) | 71.4(5/7) | 100.0(3/3) | 83.3(10/12) | 2/2 | 5.268 | 0.022 |
| TCT | 31.6(12/38) | 28.6(2/7) | 0(0/3) | 58.3(7/12) | 1/2 | 1.850 | 0.174 |
注：n表示相应宫颈病变筛查方法筛查结果呈阳性的HR-HPV呈阳性受试者例数，n′表示不同宫颈病变的HR-HPV呈阳性受试者例数。HR-HPV为高危型人乳头瘤病毒，MCM2为微小染色体维持蛋白2，TCT为新柏液基薄层细胞学检查，CIN为宫颈上皮内瘤变
本研究62例HR-HPV呈阳性受试者中，p16/Ki-67和p16/MCM2阳性率分别为43.5%(27/62)和66.1%(41/62)。HPV-16、-18呈阳性受试者的p16/Ki-67阳性率，显著高于其他12种HR-HPV呈阳性受试者，并且差异有统计学意义(χ2＝4.413，P＝0.036)。HPV-16、-18呈阳性受试者与其他12种HR-HPV呈阳性受试者的p16/MCM2阳性率比较，差异无统计学意义(χ2＝2.510，P＝0.113)。不同HR-HPV呈阳性受试者的p16/Ki-67、p16/MCM2表达情况比较，见表2。
不同HR-HPV呈阳性受试者的p16/Ki-67、p16/MCM2表达情况比较[例数(%)]
不同HR-HPV呈阳性受试者的p16/Ki-67、p16/MCM2表达情况比较[例数(%)]
| 不同HR-HPV呈阳性受试者 | 例数 | p16/Ki-67表达 | p16/MCM2表达 | ||
|---|---|---|---|---|---|
| 阳性 | 阴性 | 阳性 | 阴性 | ||
| HPV-16、-18呈阳性 | 13 | 9(69.2) | 4(30.8) | 11(84.6) | 2(15.4) |
| 其他12种HR-HPV呈阳性 | 49 | 18(36.7) | 31(63.3) | 30(61.2) | 19(38.8) |
| χ2值 | 4.413 | 2.510 | |||
| P值 | 0.036 | 0.113 | |||
注：其他12种HR-HPV是指HPV-31、-33、-35、-39、-45、-51、-52、-56、-58、-59、-66、-68。HR-HPV为高危型人乳头瘤病毒，MMC2为微小染色体维持蛋白2，HPV为人乳头瘤病毒
本研究62例HR-HPV呈阳性受试者中，TCT及p16/Ki-67、p16/MCM2双重染色对其宫颈病变筛查的敏感度分别为47.1%(8/17)、94.1%(16/17)、88.2%(15/17)，特异度分别为68.9%(31/45)、75.6%(34/45)、42.2%(19/45)，见表3,表4,表5。
TCT对62例HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变的筛查结果
TCT对62例HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变的筛查结果
| TCT | 宫颈病变最终诊断结果 | 合计 | |
|---|---|---|---|
| 阳性 | 阴性 | ||
| 阳性 | 8 | 14 | 22 |
| 阴性 | 9 | 31 | 40 |
| 合计 | 17 | 45 | 62 |
注：TCT为新柏液基薄层细胞学检查，HR-HPV为高危型人乳头瘤病毒
p16/Ki-67双重染色对62例HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变的筛查结果
p16/Ki-67双重染色对62例HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变的筛查结果
| p16/Ki-67双重染色 | 宫颈病变最终诊断结果 | 合计 | |
|---|---|---|---|
| 阳性 | 阴性 | ||
| 阳性 | 16 | 11 | 27 |
| 阴性 | 1 | 34 | 35 |
| 合计 | 17 | 45 | 62 |
注：HR-HPV为高危型人乳头瘤病毒
p16/MCM2双重染色对62例HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变的筛查结果
p16/MCM2双重染色对62例HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变的筛查结果
| p16/MCM2双重染色 | 宫颈病变最终诊断结果 | 合计 | |
|---|---|---|---|
| 阳性 | 阴性 | ||
| 阳性 | 15 | 26 | 41 |
| 阴性 | 2 | 19 | 21 |
| 合计 | 17 | 45 | 62 |
注：MCM2为微小染色体维持蛋白2，HR-HPV为高危型人乳头瘤病毒
TCT及p16/Ki-67、p16/MCM2双重染色，对62例HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC曲线分析结果显示，这3种方法对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC-AUC分别为0.580(95%CI：0.417～0.743，P＝0.336)，0.848(95%CI：0.746～0.951，P<0.001)，0.652(95%CI：0.509～0.796，P＝0.066)，见图1。p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC-AUC，显著大于TCT，二者比较，差异有统计学意义(Z＝2.736，P＝0.006)。p16/MCM2双重染色和TCT，对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC-AUC比较，差异无统计学意义(Z＝0.651，P＝0.515)。
注：TCT为新柏液基薄层细胞学检查，MCM2为微小染色体维持蛋白2，HR-HPV为高危型人乳头瘤病毒，ROC为受试者工作特征
本研究是在中国宫颈癌筛查人群中，首次采用p16/MCM2和p16/Ki-67双重染色，对HR-HPV呈阳性妇女阴道镜转诊分流效果的研究。本研究结果显示，在62例HR-HPV呈阳性受试者中，p16/Ki-67、p16/MCM2阳性率，均随宫颈病变程度增高而呈上升趋势，并且差异均有统计学意义(P<0.001)。在正常情况下，p16和Ki-67不会共同表达于同一个细胞内，但在细胞周期调控机制受损后，p16和Ki-67可共同表达于同一个细胞内[12,13]。研究结果表明，在HR-HPV导致的宫颈病变中，可检测到MCM2过表达[13]。本研究结果显示，p16/Ki-67表达与HR-HPV感染状态具有显著相关性，HPV-16、-18呈阳性受试者的p16/Ki-67阳性率为69.2%(9/13)，显著高于其他12种HR-HPV呈阳性受试者的36.7%(18/49)，并且差异有统计学意义(χ2＝4.413，P＝0.036)；但是HPV-16、-18呈阳性受试者与其他12种HR-HPV呈阳性受试者的p16/MCM2阳性率相比较，差异无统计学意义(χ2＝2.510，P＝0.113)。究其原因可能是，HPV-16、-18与宫颈癌关系更为密切，HPV-16、-18呈阳性者机体分泌更多HPV-16、-18癌蛋白所致[14]。
本研究结果发现，在HR-HPV呈阳性受试者中，p16/Ki-67双重染色筛查宫颈病变的敏感度为94.1%(16/17)，这表明p16/Ki-67双重染色可检测出大部分宫颈癌前病变，从而明显减少HR-HPV呈阳性者的阴道镜转诊率。本研究结果显示，在HR-HPV呈阳性受试者中，p16/Ki-67双重染色筛查宫颈病变的敏感度和特异度，均高于TCT，这与以往研究结果一致[15]。p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC-AUC，亦显著大于TCT，二者比较，差异有统计学意义(Z＝2.736，P＝0.006)，这说明p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的价值，较TCT高。
本研究评价p16/MCM2双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查有效性的结果显示，在HR-HPV呈阳性受试者中，p16/MCM2双重染色筛查宫颈病变的敏感度达到88.2%(15/17)，显著高于TCT的47.1%(8/17)，略低于p16/Ki-67双重染色的94.1%(16/17)；p16/MCM2双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的特异度为42.2%(19/45)，低于TCT的68.9%(31/45)和p16/Ki-67双重染色的75.6%(34/45)；p16/MCM2双重染色与TCT对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的ROC-AUC相比较，差异无统计学意义(Z＝0.651，P＝0.515)。
综上所述，p16/Ki-67双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的敏感度、特异度，均高于TCT，可有效识别宫颈异常细胞，提高宫颈细胞学诊断的准确性。p16/Ki-67双重染色操作简单，结果容易判读，技术人员经过短期培训后即可独立进行。故笔者推测，p16/Ki-67双重染色有望成为包括中国在内的医疗资源严重短缺地区HR-HPV呈阳性妇女阴道镜转诊分流的新方法。p16/MCM2双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查的敏感度高于TCT，但特异度低于后者，其对于HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变的筛查效果，仍有待进一步研究、证实。
本研究不足之处为：①因本研究是基于我国国家癌症筛查计划进行的，无法对所有HR-HPV呈阳性妇女进行宫颈活组织病理学检查，对其宫颈病变程度进行确诊。②本研究是一项评价p16/Ki-67和p16/MCM2双重染色对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变筛查效果的横断面研究，这2种方法对HR-HPV呈阳性受试者宫颈病变的筛查效果，有待大样本、多中心、随机对照的前瞻性研究进一步证实。
