
建立诱导表达IFITM3蛋白的293细胞株,为进一步研究人IFITM3对H1N1型流感病毒侵染的作用及其分子机制提供细胞模型。
构建IFITM3/pcDNA5/FRT/TO expression vector质粒及诱导表达细胞株,建立HN1型流感病毒假病毒评价系统,利用蛋白印迹(Western blot)和荧光素酶报告基因对筛选的诱导表达细胞株功能进行检测。
建立的293诱导表达细胞株能够很好表达目的蛋白,且诱导表达出来的IFITM3蛋白使H1N1型流感假病毒感染率下降97%(t = 38.08、P < 0.001),使水泡性口炎假病毒(VSVpp)感染率下降68%(t = 54.56、P < 0.001),而阴性对照组小鼠白血病假病毒(MLVpp)感染率(t = 1.282、P = 0.2208)和拉沙假病毒(LASVpp)感染率(t = 0.4814、P = 0.6377)无显著影响。
IFITM3蛋白诱导表达细胞株可以显著抑制H1N1型流感病毒感染,为进一步深入研究IFITM3抑制流感病毒感染的作用机制和分子机理提供了细胞模型和实验基础。
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流行性感冒病毒(influenza virus),是正黏病毒科(Orthomyxoviridae)的代表株,简称流感病毒,包括人流感病毒和动物流感病毒(包括猪流感病毒、马流感病毒以及禽流感病毒),人流感病毒是流行性感冒的主要病原体,可以分为甲、乙、丙3型[1,2]。然而甲型流感病毒的抗原性极易发生突变,因此由其所造成的人群病死率高,疾病传播快,多次引起世界性大流行,对全社会和医学界带来严重挑战。由于此类传染病目前仍缺乏有效药物,其转归及预后很大程度依赖机体自身免疫系统对病原体的清除。干扰素诱导跨膜蛋白3(interferon-inducible transmembrane protein 3,IFITM3)是机体内重要的抗病毒分子,通过抑制病毒与宿主细胞间膜融合限制多种病毒侵入,包括埃博拉病毒[3,4],流感病毒[5,6,7,8,9,10],SARS冠状病毒[4,11]等,而上述研究取得的成果多数基于IFITM3诱导表达细胞模型的建立,故该细胞模型对于IFITM研究有非常重要的实用性。本研究首先利用源于HEK293细胞的FLP-IN细胞株,建立IFITM3诱导表达细胞株,另外建立H1N1流感病毒的假病毒体外感染模型;在两者基础上,检测IFITM3诱导表达蛋白对H1N1型流感病毒的假病毒感染能力的影响,现报道如下。
























