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• 基础研究 •
肝癌实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞分离培养方案的优化
中华肝脏外科手术学电子杂志, 2019,08(3) : 265-269. DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2019.03.020
摘要
目的

分离培养人原发性肝癌（肝癌）实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞（CAF），并检测其生物学特性。

方法

标本来源于2015年9月至2016年10月西安交通大学第一附属医院15例肝癌患者手术切除新鲜肝癌组织。其中男12例，女3例；年龄28～64岁，中位年龄45岁；肝细胞癌13例，胆管细胞型肝癌2例。患者均签署知情同意书，符合医学伦理学规定。采用胶原酶消化法分离培养人原代肝癌细胞及CAF。倒置显微镜下观察肝癌实质及CAF的形态特征。CCK-8法测定细胞活性，免疫荧光鉴定肝癌细胞标志物AFP及CAF标志物波形蛋白（Vimentin）表达。

结果

原代肝癌实质细胞培养成功率为2/15，CAF培养成功率为11/15，均为肝细胞癌。肝癌实质细胞为上皮样细胞，铺路石样分布。CAF为长梭形或多角形，呈"鱼群样"分布。肝癌细胞与CAF生长状态良好，增殖活跃，呈对数型生长，CAF的增殖能力略强于肝癌细胞。免疫荧光染色显示原代肝癌细胞质中AFP染色阳性，CAF中Vimentin蛋白表达阳性。

结论

采用胶原酶消化法可以成功获得高增殖活性的人原代肝癌实质细胞及CAF。

引用本文: 向俊西, 刘鹏, 田波彦, 等.  肝癌实质细胞及肿瘤相关成纤维细胞分离培养方案的优化 [J/OL] . 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2019, 08(3) : 265-269. DOI: 10.3877/cma.j.issn.2095-3232.2019.03.020.
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原发性肝癌（肝癌）对化疗药物的敏感性个体间差异很大，这种差异导致肝癌化疗的临床有效率低于30%[1]，即使是对肝癌治疗效果最佳的靶向药物索拉非尼的有效率也仅有40%左右[2,3]。因此，如果能利用手术切除的肝癌组织，分离出肝癌细胞及肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts，CAF），在体外构建肝癌模型并准确筛选敏感药物，实现术后个体化的辅助化疗，将会有效提高治疗有效率，减少肿瘤的复发及转移，延长患者生存时间。个体化药敏实验的研究已经开展多年[4]，但进入临床实践的很少，其主要原因是肝癌细胞分离培养缺少统一的技术标准，体外分离培养的成功率较低，无法应用于临床实践[5,6]。基于此，本实验旨在建立了一套高效的人肝癌细胞与CAF原代培养方法，并研究其细胞形态和生长特性，为进一步构建体外肝癌模型及筛选个体化药物敏感谱提供实验基础。

　
　
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