Ajuba最初被发现存在于细胞连接中，随后有研究结果表明其可在核质间穿梭及传递信号。在正常生理条件下，Ajuba通过调控细胞周期、参与信号通路，从而促进细胞的增殖和分化。此外，Ajuba还与乳腺癌、结直肠癌和头颈部鳞状细胞癌等多种肿瘤的发展密切相关，但在不同的肿瘤中，Ajuba作为癌基因或抑癌基因而发挥生物学功能。在肿瘤中，Ajuba同样可以促进肿瘤细胞的增殖，并且通过调控上皮-间质转化进而促进肿瘤的侵袭和转移过程可观的治疗前景。针对Ajuba开发相应的小分子抑制剂或靶向药物已取得的一些进展进行综述。
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随着科学技术的进步和发展，越来越多的技术被应用到医疗领域。肿瘤的治疗模式也逐步发展为精准医学，即在综合考虑患者项目特征的基础上，利用基因检测确定基因分型，为肿瘤患者量身定制最佳的治疗方案。近年来，在多种肿瘤患者中检测到突变的Ajuba基因。Ajuba蛋白可以在细胞核质间穿梭，发挥不同的功能。在细胞核中，Ajuba蛋白作为转录共抑制子，抑制SNAIL1等基因的转录；在细胞质的中心体中，Ajuba蛋白参与细胞的有丝分裂；在细胞表面，Ajuba蛋白具有形成并稳定细胞连接的作用。本文对其结构及功能，尤其是在肿瘤中的作用进行综述。
Ajuba属于Zyxin/Ajuba家族，由538个氨基酸组成，此家族还包括Zyxin、Trip6、Wtip、Limd1和Lpp。Zyxin/Ajuba家族成员不与DNA原件结合，其主要在与蛋白质间相互作用中发挥功能[1,2,3]。哺乳动物的Ajuba蛋白家族包括Ajuba、LIMD1和WTIP。
Ajuba是由羧基端的LIM区域和氨基端的PreLIM区域组成。LIM区域的起始位置是两个相互衔接的锌指结构，而后是3个相互串联且高度相关的LIM结构域；PreLIM区域有富含脯氨酸的SH3识别模体[2, 4]。Ajuba独特的核输出序列（nuclear export sequence，NES）位于PreLIM区域内靠近整个蛋白的中间部位（aa NO. 289~297），缺失NES或者全部PreLIM区域会导致Ajuba在细胞核中积累[3]。Ajuba的PreLIM和LIM结构域经常与不同的蛋白相互作用，而影响细胞功能[3, 5]。Ajuba或其PreLIM结构域过度表达会促进细胞增殖但不会改变细胞表型；而高表达Ajuba的LIM结构域会抑制细胞增殖，并促使其自发分化[5]。
Ajuba作为一种中心体蛋白，可以调控细胞分裂、脊椎动物的纤毛形成和左右轴的确定[6]。作为接头蛋白和支架蛋白，Ajuba参与多种蛋白复合物的组装，从而调节细胞黏附、迁移、细胞骨架的形成、细胞命运的决定、有丝分裂、miRNA的成熟以及细胞增殖和分化[6,7,8,9,10,11]。Ajuba作为转录共抑制因子，能够抑制基因的表达[12]。Ajuba抑制ATR相关的DNA损伤应答，参与肿瘤侵袭和转移[13]。Ajuba还是miRNA介导基因沉默机制中的一个重要组成部分[14]。
Ajuba是细胞质接头蛋白，具有在细胞连接和细胞核间穿梭的能力，从而发挥信号传递的功能[15]。Ajuba是Hippo信号通路上游的调控因子，具有上皮完整性传感器的功能，是重新进入细胞周期所必需的[16]。Ajuba通过抑制Hippo通路中大肿瘤抑制因子1/2（large tumor suppressor type 1/2, LATS1/2）的核心激酶促进YES相关蛋白（Yes-Associated protein，YAP）的致癌活性[17,18]。在免疫系统的白细胞介素-1（interleukin-1，IL-1）信号通路中，Ajuba作为转录因子影响aPKC/p62/TRAF6多蛋白复合物的组装和活性，从而调节核转录因子-κB（NF-κB）的活性[15]。有报道表明Ajuba是Wnt信号通路的负调控因子[19]。
对Ajuba的机制研究表明，其通过同Aurora家族成员、细胞周期素等相互作用，参与细胞周期进程，促进细胞增殖；通过与Salvador 1（Sav1，又称为WW45）结合，发挥抑制凋亡的作用。从Ajuba与肿瘤相关蛋白的关系综述其参与肿瘤增殖凋亡的途径。
在乳腺癌细胞系中可检测到Ajuba的表达，发现Ajuba虽然在每个细胞周期的表达水平基本恒定，但在肿瘤细胞的有丝分裂过程中被磷酸化，从而促进了细胞增殖[20]。研究结果显示，在有丝分裂过程中Ajuba的磷酸化与Aurora-A有关。在细胞周期的G2期，激活的Aurora-A招募CDK1-cyclin B复合物至中心体，促进细胞进入有丝分裂期[21,22,23]。在进入有丝分裂期时，Ajuba被Aurora-A磷酸化，然后增强Aurora-A的活性。Ajuba是Aurora-A活化所必需的。若没有Ajuba，Aurora-A的氨基端和羧基端相互结合，抑制了其自身激酶的活性，阻止或延缓Hela细胞从G2期进入有丝分裂期，而加入Ajuba-LIM就会消除这种影响。Ajuba的LIM结构域通过竞争性结合Aurora-A的氨基端（aa 1~128, Nt），抑制了Aurora-A氨基端和羧基端的相互作用，于是Aurora-A羧基端恢复了被氨基端抑制的自我磷酸化，同时Aurora-A的催化区域（aa 129~403, Cd）能够磷酸化Ajuba的PreLIM区域[21]。（图1）
尽管Aurora-A突变体（如AurA-K250G和AurA-D294G/Y295G）缺乏氨基端和羧基端的相互抑制，但因其不能和Ajuba相互作用，所以仍然不具有活性。此外，这些变异体过度表达均会导致错误的扩增和纺锤体形成，使细胞周期阻滞在G2/M期，随后即发生细胞凋亡[22]。Ajuba可诱导Aurora-A突变体在Thr288位置磷酸化。K99G和K119G突变体虽然有Aurora-A的结构改变，但不影响Ajuba和Aurora-A的结合，因此这些突变体可通过与Ajuba直接结合恢复Aurora-A氨基端的结构，随后突变所导致的细胞周期阻滞也随之被消除[24]。总之，在G2期Ajuba作为Aurora-A的激活因子对于细胞进入有丝分裂期是不可或缺的。在体内细胞周期转换过程中，Ajuba蛋白水平没有波动，说明Ajuba对于Aurora-A的激活是必要的，然而仅有Ajuba还不足以激活Aurora-A [25]。在果蝇中，Ajuba不是Aurora-A的激活子，但对于维持Aurora-A的活性是必要的[26]；而在蟾蜍中，Ajuba能否激活Aurora-A尚无法确定[27]。
Aurora-B和BUBR1是保证有丝分裂正确进行的两个重要检查点。在有丝分裂由中期到后期的过程中，Ajuba和Aurora-B、BUBR1共同定位于着丝粒。三者对于保证染色体正确的分离具有重要作用，若改变Ajuba的位置，则会提前退出有丝分裂。如果缺失BUBR1，会阻止Ajuba定位于着丝粒；但如缺失Aurora-B不会改变Ajuba在着丝粒的定位，即使纺锤体发生改变、细胞出现多极性时，Ajuba的定位也不会有所改变[4, 28]。
在头颈部鳞状细胞癌（head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC）中，利用基因组测序却发现了失活性突变的Ajuba基因[29]，通过进一步研究，发现Ajuba被推断为HNSCC的抑癌基因[30]，并作为Wnt信号通路的负调控因子发挥作用[19]。Ajuba被证明是一种β-catenin结合蛋白，Ajuba氨基端的3个LIM结构域（氨基酸232~538）均可与β-catenin的Armadillo重复序列7~9（氨基酸400~530）相结合。通过这种结合，表明Ajuba可抑制依赖β-catenin激活的细胞周期素D1（cyclin D1）的启动子，从而阻碍了细胞周期的进程，抑制细胞增殖。然而，在正常的有丝分裂过程中，CDK1可以磷酸化Ajuba，而促使其发挥促进细胞增殖的作用[19]。
YAP是转录共激活子，其通过加速Cyclin E和DIAP1的转录促进细胞增殖、抑制凋亡[17]。在哺乳动物和果蝇细胞中，Ajuba蛋白可与大肿瘤抑制因子（LATS）相互结合，以阻止LATS磷酸化YAP，非磷酸化的YAP是具有活性的，因此Ajuba增加了YAP的活性，从而促进细胞增殖。哺乳动物Ajuba家族的3个成员都与LATS1/2相互作用，尤其与LATS2作用最强[17]。
在恶性间皮瘤（malignant mesothelioma，MM）中，利用免疫组化染色显示常有Ajuba表达下调的情况。Ajuba被作为NF2-Hippo信号通路最后一步的激酶，虽然其表达的缺失与NF2-Hippo信号通路其他成员的表达无关，但在Ajuba失活的细胞系里去磷酸化（活化状态）的YAP有所增加。此外，研究结果发现，在MM细胞中Ajuba可传导抑制YAP靶基因的信号。与上述机制研究一致，Ajuba的这种抑制作用和LATS2相关。当向MM细胞内转染表达Ajuba的慢病毒时，可以显著抑制肿瘤细胞的增殖和生长；而当敲除LATS2时，Ajuba的这种抑制作用也随之消失[31]。
在研究婴幼儿血管瘤的过程中，利用免疫组化实验可观察到肿瘤细胞的增殖程度与Ajuba的表达水平关系[32]。随着血管瘤从增殖期到退化完成期，Ajuba的表达量逐步减少，细胞增殖也同步下降。研究结果再次验证了Ajuba作为YAP的磷酸激酶可起到促进细胞增殖、减少凋亡的作用[33,34]。
WW45分别与巨噬细胞刺激蛋白1（macrophage stimulating 1，MST1）和HAX1相互结合，促进MST1介导的细胞凋亡，减弱HAX1的抗凋亡效应。Ajuba通过与WW45结合后可能破坏了WW45的稳定性或与MST1和HAX1产生竞争性抑制，从而促进细胞凋亡[17]。EGFR-Ras-MAPK信号通路可促进Ajuba的磷酸化、维持Ajuba蛋白稳定，并且能增强Ajuba、LATS1与接头蛋白WW45三者的结合[35]。
在结直肠癌（colorectal cancer，CRC）标本中往往可以检测到高表达的Ajuba，而且Ajuba的表达水平与干扰素诱导基因2（IFN-induced protein with tetratricopeptide repeats 2，IFIT2）和pSTAT1呈负相关[36]。IFIT2基因是一种抑癌基因，也是γ-干扰素（interferon-γ，IFNγ）的一种重要的靶基因，参与IFNγ诱导的细胞凋亡[37]。相关研究表明[36]，Ajuba可通过与JAK1的FERM结构结合，使JAK1和IFNγ受体分离，抑制STAT1的磷酸化以及随后的细胞核移位，最终导致IFIT2不能激活。由此可以推断，Ajuba可能通过抑制JAK1/STAT1/IFIT2信号通路，抑制结直肠癌细胞凋亡、促进肿瘤生长，使Ajuba成为CRC的治疗靶点和诊断标志物。
Ajuba诱导发育和分化的作用主要与其出核序列（NES，位于aa289~297）和LIM区域有关。缺少NES的Ajuba会在细胞核中积累，并且抑制细胞增殖而开始自发分化。Ajuba的第一、二个LIM结构域抑制增殖但不诱导分化，而第三个LIM结构域是细胞分化所必需的，Ajuba诱导分化还需要c-Jun激酶激活[8]。
Ajuba作为过氧化物酶体增殖剂激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptors γ，PPARγ）的共激活子调控脂肪细胞的分化，敲除Ajuba使PPARγ基因表达下降，脂肪细胞分化延迟[12]；Ajuba可调控身体左右不对称结构的发育，敲除Ajuba会导致左右器官随机不对称和决定身体早期轴向的基因表达改变[6]；在蟾蜍神经脊发育的过程中，SNAIL/SLUG是转录抑制子，促使细胞发生上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）过程，而Ajuba是SNAIL/SLUG的共抑制子。Ajuba通过调节细胞生存和边界识别，而非增殖，影响神经嵴的发育，进而调控蟾蜍神经嵴的发育[2]。
基因组测序显示，Ajuba在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）中频繁发生失活性突变，免疫印迹实验也在ESCC标本中检测到截短的Ajuba[38]。另有研究结果发现，在ESCC细胞系中敲除Ajuba不仅可促进肿瘤细胞生长、增殖，还能增加其迁移能力和侵袭性[38]。在小细胞肺癌（SCLC）中，敲除Ajuba后肿瘤细胞的形态发生改变，由梭形变为近似圆形，说明其侵袭能力有所下降[39]。同样,在前列腺癌中也有研究结果发现，miR-193a-3p过表达抑制了其靶基因Ajuba的表达水平，进而导致肿瘤细胞的迁移能力增加，在前列腺转移癌中也有Ajuba的表达[40]。以上研究结果均表明，Ajuba除可以促进肿瘤的生长，且在肿瘤进展中发挥重要的作用。
在CRC的临床标本和细胞系中均发现高表达的Ajuba蛋白，而在临床标本中还发现Ajuba的表达与E-cadherin的表达呈负相关，异位表达的Ajuba能诱导EMT并增强CRC细胞的迁移和侵袭能力[41]。有研究结果显示，Ajuba作为SNAIL的共抑制子，可增强SNAIL诱导的E-cadherin的转录抑制和EMT。SNAIL家族的SNAG结构域通过与Ajuba家族蛋白结合，可招募和/或维持Ajuba蛋白处于核中，Ajuba的PreLIM区域会招募PRMT5，最终在E-cadherin基因最邻近的启动子区域形成一个SNAIL-Ajuba-PRMT5三元复合物；随后该位点的组蛋白精氨酸甲基化增加，从而发挥抑制E-cadherin转录的作用；而且，细胞内Vimentin和Fibronectin的表达增加。在缺少Ajuba的细胞中，SNAIL不能诱导类似的改变，表明Ajuba是SNAIL介导的EMT的关键共激活子。总之，Ajuba在CRC中是一个促癌基因，其可通过促进EMT而影响肿瘤的转移。因此，Ajuba蛋白有望成为转移性结直肠癌治疗的新靶点。
Ajuba对于Rac的激活是必需的，缺乏Ajuba的细胞，Rac的激活会受损，因而这种细胞的细胞连接不能维持机械应力。Rac的效应分子PAK1可直接在thr172位点磷酸化Ajuba；反之，磷酸化Ajuba的表达可以消除PAK1抑制作用；同时，磷酸化的Ajuba与Rac的结合和相互作用增强，尤其是与激活的Rac的相互作用。磷酸化的Ajuba能够调控Rac的动力学，而非促使Rac招募到细胞连接。因此，Rac-PAK1-Ajuba反馈回路可以整合细胞连接中与肌动蛋白重构相关的时空信号并且稳定已经装配好的钙黏素复合物。
Ajuba有助于维持上皮表型，其主要通过影响F-actin成束及细胞连接处Rac的功能而实现。Ajuba可能是细胞间黏附与细胞运动交叉网络之间的一个重要组分。当肿瘤进展时，细胞连接断裂，Ajuba表达减少可能会影响Rac通路的活性和特异性，并促进EMT[2,3, 42]。
Ajuba是β-catenin结合蛋白，且通过与β-catenin的结合能够促进糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase-3β，GSK-3β）介导的β-catenin磷酸化。Ajuba首先被GSK-3β磷酸化（磷酸化的Ajuba是稳定的），发生依赖Wnt-3A刺激的GSK-3β失活，Ajuba去磷酸化，随之降解，而β-catenin与此同时被积累起来。有报道预测Wnt信号通路基因Ajuba失活性改变可能与HNSCC相关，尤其主要与喉部的HNSCC有关[29]。但其是否因为Ajuba失活促使β-catenin的积累，从而导致肿瘤细胞的EMT有待验证。
在过去的十多年间，相关学者对Ajuba的调控及生物学功能展开了深入的研究，发现其在细胞增殖、胚胎发育以及肿瘤生物学中的相关作用。文献[30]表明，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PLK1）抑制剂就可以使Ajuba突变的HNSCC细胞的细胞周期停滞在G2/M，随后细胞发生凋亡，而达到抑制肿瘤生长的作用，其将为HNSCC提供一种新的治疗方法。目前Ajuba的功能已逐渐得到重视，有望成为治疗某些疾病的靶点，如与PPARγ相关的新陈代谢疾病[12]。值得注意的是，Ajuba在众多肿瘤中发挥重要的功能，但其表现出来的作用并不一致。如发生失活性突变的Ajuba促进MM和ESCC细胞的增殖；而在胶质瘤和血管内皮瘤中，Ajuba表达增加促进这两种肿瘤细胞的增殖。在结直肠癌中，异位过度表达的Ajuba诱导其发生EMT，并促进肿瘤转移和侵袭。而HNSCC里，Ajuba似乎又发挥类似抑癌基因的作用，Ajuba失活性突变会导致异常的细胞极性和分化。围绕Ajuba进行转化医学探索将为治疗肿瘤提供新的方向。
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