探索miR-17在糖尿病肾病体外细胞模型中的调节作用机制。
选取人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)作为模型细胞，构建高糖诱导的糖尿病肾脏体外细胞损伤模型。将细胞分为空白组(正常培养基)、葡萄糖组(高糖诱导)，在高糖诱导模型组的基础上又分为miR-17 inhibitor组和NC inhibitor组。实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测空白组和高糖模型组miR-17及核转录因子(Nrf-2)表达情况。再通过细胞活力检测试剂盒(CCK8)检测各组细胞增殖差异，以及流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。WB检测Nrf-2/血红素氧化酶-1(HO-1)信号通路相关蛋白表达，双荧光素酶报告基因检测法检测miR-17对Nrf-2的靶向关系。
miR-17 inhibitor能够显著促进高糖诱导的HK-2细胞增殖，且明显抑制高糖诱导的HK-2细胞的凋亡，同时miR-17能够抑制Nrf-2/HO-1信号通路，并且双荧光素酶报告基因结果显示miR-17具有靶向抑制Nrf-2的作用。
MiR-17能够靶向Nrf-2对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤具有一定的修复能力。
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糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)通常是由代谢紊乱造成的全身性疾病，是终末期肾脏疾病的主要原因，具有高死亡率、严重危害人类的生命健康，影响生活质量[1]的特点。DN作为糖尿病的常见并发症，目前仍不能得到有效治疗，因此，迫切需要开发更有效的药物来预防或减慢其发展。微小RNA(miRNA)是一类短的非编码RNA，可通过靶向基因的3′UTR调节基因表达，已有研究报道miRNA参与了DN的发展[2,3,4]。miR-17家族由人类染色体13、X和7上的14个成熟miRNAs组成[5]，miR-17已被报道在DN中表达上调[6]，但其作用机制尚不明确。前期调研并通过Targetscan发现编码蛋白核转录因子(Nrf-2)的NFE2L2基因是miR-17的潜在靶基因。Nrf-2是一种具有调节细胞氧化应激的转录因子，能够保持细胞氧化应激稳态，维持超氧化物歧化酶(SOD)在机体内的活性，清除机体氧自由基。抑制丙二醛的产生，从而抑制丙二醛与蛋白质、核酸等生命大分子的交联聚合[7]。Nrf-2蛋白已被证明能通过Nrf-2/血红素氧化酶-1(HO-1)通路参与氧化应激保护DN导致的肾脏损伤[8,9,10]。笔者推测DN中升高的miR-17抑制了Nrf-2的表达，加剧了氧化应激反应，促进了DN的病理进程。本研究采取体外高糖刺激人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤建立体外肾损伤模型[11]，转染miR-17 inhibitor，在细胞水平检测HK-2细胞凋亡、增殖情况，以及丙二醛、SOD的水平。探讨Nrf-2/HO-1信号通路参与HK-2细胞氧化应激的机制，确定miR-17对氧化应激的调节关系。高糖诱导的HK-2细胞是高度模拟DN的体外模型，研究miR-17在HK-2细胞的分子机制，为miRNA治疗DN提供一定的理论依据。
