新生儿百日咳诊断比较困难，容易延误治疗，既往国内仅有一些零星的个案报道，近来，深圳^[3]、西安^[7]、重庆^[8]陆续报道了较大样本实验室确诊新生儿百日咳的临床特征，除了阵发性咳嗽外，发绀、呼吸暂停较为多见，而鸡鸣样回声少见，与国外报道基本一致^[9,10]，提示新生儿期不明原因的发绀、呼吸暂停要更多地考虑百日咳的可能。

肺炎是百日咳最常见的并发症，年龄越小越易发生，而且容易重症化。总体发生率并不清楚，美国曾有统计在<2月龄的婴儿百日咳中并发肺炎的为25.0%^[11]；国内报道在住院百日咳患儿中，影像学确诊的肺炎为55.9%～88.5%^[12,13,14]，肺实变或不张也容易见到(8.1%，20/247例)，而且是重症百日咳的独立高危因素^[12]。与其他肺炎比较，百日咳肺炎发热和肺部阳性体征少见，咳嗽持续时间更长，常伴呕吐，更容易出现呼吸困难^[15]。

百日咳脑病是百日咳的严重并发症，国外报道发生在0.5%～1.0%的百日咳病例中^[11,16]，国内报道与之相仿^[17]，虽不常见，但可导致严重后果。惊厥发作是百日咳脑病最常见的临床表现，其他表现还包括局部麻痹、共济失调、失语、失明、耳聋、去大脑强直等^[18]。百日咳脑病较多地发生在咳嗽开始的第2－4周，在这一时期临床医师应提高警惕，及时发现病情变化。血白细胞、淋巴细胞比例明显升高及合并肺部感染可能是百日咳脑病发生的高危因素，疫苗接种虽不能完全阻止百日咳的发生，但对表现为脑病的重症百日咳的发生仍可能有相当的预防作用^[17]。

高白细胞血症是婴幼儿百日咳的显著临床特征。在一项前瞻性多中心监测研究中，经培养证实为百日咳的患者中72.0%存在白细胞增多^[19]；国内重庆报道PCR确诊的住院百日咳患儿中90.7%出现白细胞升高^[12]；未接种疫苗或部分接种的小婴儿往往白细胞升高更为显著，且高白细胞血症仅见于小婴儿而不发生在青少年及成人。白细胞升高主要包括淋巴细胞及中性粒细胞，以淋巴细胞升高为主，若中性粒细胞与淋巴细胞比例发生倒转提示病情较重^[20]。据报道白细胞高于30×10⁹/L，提示重症百日咳可能，高于100×10⁹/L时病死率高达80.0%^[21]。更新的研究发现在百日咳患儿外周血涂片中有较多的裂隙淋巴细胞^[22,23,24]，此发现为实验室诊断提供了新思路。

百日咳患儿中肺动脉高压发生率国内报道相对较低，重庆的研究显示在住院百日咳患儿中仅为0.4%(1/247例)^[12]，国外阿根廷报道在门诊及住院的所有百日咳患儿中，发生率为4.9%(5/102例)^[25]，明显高于重庆，可能与阿根廷的患儿中27.5%有基础性疾病，主要是早产和营养不良^[25]；美国一个多中心的队列研究显示，入住儿科重症监护病房(PICU)的百日咳患儿中肺动脉高压的发生率高达12.6%(16/127例)，统计结果也表明，肺动脉高压是百日咳重症和死亡的高危因素^[26]，超声监测有助于早期发现，以便早期干预。

百日咳患儿合并其他病原的感染比较常见，呼吸道病毒(呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒、副流感病毒等)为多，也有肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体等。国外有研究认为合并呼吸道病毒感染对百日咳的严重度无明显影响^[27]，也有百日咳与肺炎支原体双重感染致死的报道^[28]，国内有研究显示混合感染会加重百日咳患儿的临床表现^[29]，因此对百日咳患儿混合其他病原感染的临床意义，特别是区分定植与致病还需进一步探讨。

从患儿呼吸道采集的标本中培养出百日咳鲍特菌被视作实验室确诊的金标准，特异性很高，但敏感性较差，需要特殊的选择性培养基，而且受病程、抗菌药物使用、标本质量、标本转运条件及培养方法等多种因素的影响。为了研究百日咳鲍特菌及副百日咳鲍特菌的致病性和进化特点，监测其对各种抗生素的敏感性，细菌培养是不可或缺的，推荐在患儿咳嗽2～3周完成采样，进行细菌培养以获得更好的阳性率^[39]。

标本接种于RL或添加了15%脱纤维马血的BG培养基，可以在培养基内添加氨苄西林以抑制正常菌群的生长。经过35～36 ℃且保持足够湿度的条件下培养7 d观察典型菌落，副百日咳鲍特菌较百日咳鲍特菌生长快，当分离出副百日咳鲍特菌时仍需观察菌落培养至第7天，因有百日咳鲍特菌和副百日咳鲍特菌混合感染的情况发生^[40]。有报道延长孵育时间至12 d能增加分离率^[41]。其鉴定可通过革兰染色、氧化酶等生化反应及百日咳、副百日咳特异性抗体凝集反应进行确认。

当采集到的标本不能立即进行培养时，可－80 ℃冻存后选择适当的时机进行培养检测。

PCR是更为敏感的百日咳鲍特菌检测方法，其敏感性较传统培养方法高2～6倍^[42]。在鲍特菌属中，以IS481、IS1001、IS1002、h－IS1001、ptxP和recA为靶点进行检测，不同靶点的组合应用可鉴别与临床感染相关的鲍特菌属，如可针对最常用的IS481、IS1001和ptxP靶位进行百日咳和副百日咳鲍特菌的核酸检测^[30]。PCR法的敏感性随咳嗽时间延长而下降，最好在发病3周内采集标本，但即使超过4周，也可能获得准确结果，该检测方法虽然昂贵，但较细菌培养却更为敏感和快速。目前国内已有一些商品化的PCR试剂盒，针对最常用的IS481和IS1001靶位进行百日咳和副百日咳鲍特菌的核酸检测，但均尚未得到临床应用许可。PCR技术敏感性高，特异性强，特别要注意防止污染，包括在检测前、检测中和检测后各个环节，需严格按标准要求对实验室进行分区^[43]。

机体可针对PT，丝状血凝素(FHA)，百日咳黏着素(PRN)，凝集原1、2、3(AGG1、AGG2、AGG3)等抗原产生不同抗体，PT为百日咳鲍特菌特有，而针对其他抗原产生的抗体可与副百日咳鲍特菌、支气管败血鲍特菌等发生交叉，另外IgA、IgM抗体检测在敏感性、特异性及可重复性方面不及IgG抗体，因此最常用PT－IgG抗体检测^[32]，可以作为早期诊断的参考，但需要充分考虑患儿年龄和免疫状态。世界卫生组织(WHO)推荐对感染后2～3周的患儿使用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测特异性的PT－IgG，恢复期与发病初期双份血清PT－IgG滴度出现显著升高(>2～4倍)、未接种疫苗或免疫接种超过1年的个体血清中单次检测PT－IgG滴度明显升高(>80～100 IU/mL)可以作为近期感染百日咳鲍特菌的证据，但单次ELISA检测PT－IgG不推荐在<3月龄儿童中使用，对于1年内接种过百日咳疫苗的患儿，百日咳血清学检测结果解释不可靠^[30]。

鼻咽拭子或鼻咽抽吸物涂片后使用荧光抗体进行染色，方法快速而简便，但该荧光抗体与鼻咽部正常菌群存在广泛的交叉反应，且受检测者操作技能和临床经验影响，使得染色结果难于解释，与PCR技术相比，其敏感度低、特异性差而少有应用^[44]。该技术可以与细菌培养技术联合进行百日咳鲍特菌的检测。