铜绿假单胞菌在医院获得性肺炎病原菌分析中仍占主要地位^[1]，其临床分离株对抗菌药物的耐药率仍居高位^[2]，尤其是老年患者^[3]，由于自身基础疾病多、免疫力低下和长期使用抗菌药物等更易感染并产生耐药性。多年来，对于铜绿假单胞菌的耐药基因研究较多^[4]，尤其是β-内酰胺酶类耐药基因，而对其毒力基因仅有胞外酶的研究^[5]。对铜绿假单胞菌临床分离株的毒力基因和耐药基因联合观察国内研究较少见，针对60岁以上的老年患者的研究更少。因此，该研究收集医院感染的铜绿假单胞菌老年患者分离株进行了9种毒力基因及23种耐药基因检测，以了解毒力基因和耐药基因的携带状况。现报告如下。

铜绿假单胞菌在自然界呈广泛分布，常定植于人类的呼吸道黏膜，一般情况下，并不导致人体组织炎症。但当人体受到意外严重创伤或医疗操作后(如：机械通气、保留导尿管和手术)以及长期卧床的老年人，尤其是有糖尿病、肺部慢性疾病、血液病或化疗的免疫力低下的老年患者，更易导致菌群失调，使铜绿假单胞菌快速增殖引起呼吸道感染。据世界卫生组织(WHO)报道，临床上50%以上的老年人肺部感染的发病率和病死率与年龄成正比^[10]。铜绿假单胞菌药物敏感性试验显示，氨基糖苷类药物耐药率最高，为47.22%，其次为喹诺酮类药物(30.56%)、第三代头孢菌素类(27.78%)、第四代头孢菌素(8.33%)、β-内酰胺类与酶抑制剂的复合制剂(8.33%)，所有菌株均对碳青霉烯类药物敏感。

该实验菌株的耐药率不高，可能与老年患者处于铜绿假单胞菌的肺炎感染早期，未大量应用抗菌药物有关。

9种毒力基因研究中，除exoU外，其余8种基因均被检出。其中exoS、exoT、exoY的检出率高达100.00%，其次plcH、aprA、algD、toxA检出率均高达97.22%，pyo检出率亦达44.44%。exoS、exoT、exoU、exoY基因均表达胞外酶，这些胞外酶由铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统转运到宿主细胞的细胞质中，最终抑制宿主免疫功能、干扰宿主细胞信号传导，引起感染发病^[5]；plcH基因表达溶血磷脂酶C，对宿主细胞的细胞膜有破坏作用^[11]；aprA基因表达碱性蛋白酶，对宿主具有灭活细胞因子、破坏免疫球蛋白及补体^[12]，起免疫抑制作用；algD基因表达胞外多糖，起抗吞噬作用^[13]；toxA基因表达外毒素抑制宿主细胞蛋白质合成；pyo基因表达铜绿假单胞菌螯铁蛋白，与宿主细胞竞争铁离子。铜绿假单胞菌中毒力基因的存在，使老年人呼吸系统生理组织结构发生改变，抑制了机体的免疫功能，进而加重了感染的进程。所以该研究铜绿假单胞菌毒力基因的高携带率与老年人的获得性肺炎关系密切。

23种抗菌药物耐药基因研究中，共检测出6种耐药基因，包括2种头孢菌素类耐药基因(blaCARB、blaDHA)和4种氨基糖苷类耐药基因[aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ]，其中ant(2″)-Ⅰ的分离率最高，为27.78%，其次为blaCARB(25.00%)、aac(6′)-Ⅱ(25.00%)、aac(6′)-Ⅰb(22.22%)、blaDHA(8.33%)和ant(3″)-Ⅰ(8.33%)。氨基糖苷类耐药基因的分离率高于头孢菌素类，这与药敏试验中氨基糖苷类耐药率高于头孢菌素类呈正相关。所有菌株未携带blaIMP、blaVIM和blaNDM碳青霉烯类β-内酰胺酶基因，与对碳青霉烯类药物均敏感呈正相关。说明抗菌药物耐药情况与耐药基因的携带状况密切相关。

32种基因的携带状况研究显示，每株铜绿假单胞菌均携带5～8种毒力基因和0～4种耐药基因。其中15株只携带毒力基因，其余21株除携带6～8种毒力基因外，分别还携带1～4种耐药基因。本研究中毒力基因的携带率远高于耐药基因，所以推测出毒力基因是促使老年患者出现发热、咳嗽、影像学检查有炎症的主要原因。

铜绿假单胞菌临床分离株的耐药性发展迅猛，国内一直有耐碳青霉烯类菌株发现^[2]。而国外则有学者报道从铜绿假单胞菌耐药株中发现新颖β-内酰胺酶基因(PME、FIM、NDM)^[14,15]或发现β-内酰胺酶基因新亚型(TEM-116、GES-18、IMP-51、OXA-198、OXA-205)^{[16,17,18,19,20]}，并有报道铜绿假单胞菌亦可产原本为肺炎克雷伯菌特有的KPC型β-内酰胺酶^[21]或可同时携带多种重要的耐药酶导致耐药程度加剧^[22]，甚至产NDM型β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌对粘菌素也不敏感^[23]。

对铜绿假单胞菌老年患者分离株进行9种毒力基因及23种耐药基因检测，能更好的分析老年患者感染病原菌的致病机理，本研究结果表明菌株携带的plcH等8种毒力基因是促使老年患者出现获得性肺炎的主要原因。该研究检测基因型有限以及实验地点和对象较为单一，后续将进一步扩大菌株数进行更为深入的研究。